[发明专利]一种L-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体的分离方法

说明书

本发明公开了一种L‑丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体的分离方法，所述分离方法包括在碱性条件下，使用GITC溶液对L‑丙氨酸异丙酯盐酸盐及其异构体进行衍生化，衍生化后的L‑丙氨酸异丙酯盐酸盐及其异构体采用HPLC色谱法进行分离和检测。该分离方法能够有效的分离L丙氨酸异丙酯盐酸盐和其对映异构体D‑丙氨酸异丙酯盐酸盐，并能够准确的测定其对映异构体的含量。本方法采用特定的反相方法和等度洗脱方式，简单且易于操作，峰型较好，分离度合格，方法学验证显示本方法专属性强，灵敏度高，准确度以及线性均比较良好。

技术领域

本发明涉及药物检测分析领域，更具体地，涉及一种L-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体的分离方法。

背景技术

L-丙氨酸异丙酯盐酸盐是一种重要的医药中间体，也是合成替诺福韦艾拉酚胺等原料药的一种重要起始原料，其结构中具有一个手性中心。当以L-丙氨酸异丙酯盐酸盐为起始原料合成替诺福韦艾拉酚胺等原料药时，其对映异构体D-丙氨酸异丙酯盐酸盐可能也会参与反应，生成原料药相应的异构体杂质，例如D-丙氨酸异丙酯盐酸盐则是替诺福韦艾拉酚胺手性杂质的来源之一。因此，对物料杂质的研究有助于药物的合成工艺优化和质量控制，研究L-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体D-丙氨酸异丙酯盐酸盐的分离检测方法，可为评价L-丙氨酸异丙酯盐酸盐的质量提供较好的参考，也为优化L-丙氨酸异丙酯盐酸盐合成工艺提供技术依据，对确定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐中D-丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体所引起的不良反应具有重大意义。

经查阅文献可知，目前关于L-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体D-丙氨酸异丙酯盐酸盐的分离方法研究报道非常少。如陈楠等人(陈楠,等.高效液相色谱法分离检测L-丙氨酸异丙酯盐酸盐的对映异构体杂质[J].中南药学,2020,(06):997-997)公开了采用高效液相色谱法分离检测L-丙氨酸异丙酯盐酸盐的对映异构体杂质，该方法以邻苯二甲醛/N-乙酰-L-半胱氨酸(OPA/NAC)对L-丙氨酸异丙酯盐酸盐及其异构体进行手性衍生化，生成具有紫外吸收的一对非对映异构体衍生物(波长为333nm)，经5-氟苯基色谱柱分离，采用0.1％三氟乙酸水溶液-甲醇的流动相体系进行梯度洗脱。然而，该方法对于色谱柱的要求苛刻，对柱前衍生前的衍生反应时间也限制严格，检测成本偏高；且衍生化反应产物的稳定性时间较短，仅为2.5h，极有可能会影响实验结果的准确性；这些无疑都不利应用于L-丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的拆分。

专利CN110849980A公开了一种检测L-丙氨酸异丙酯盐酸盐及其对映异构体的检测方法，该方法中的色谱柱填充剂为冠醚手性柱(硅胶表面涂敷有手性冠醚)，且需要使用强酸性流动相，例如pH值为1.0～2.0的高氯酸水溶液，对色谱柱的损害较大，而且检测过程对温度的要求过于严苛。

本发明为解决L-丙氨酸异丙酯盐酸盐异构体与其对映异构体难分离问题，提供了一种便捷、高效、准确的分离方法。

发明内容

本发明的目的是克服上述现有技术中的缺陷和不足，提供一种L-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体的分离方法，该方法在碱性条件下采用GITC溶液对L-丙氨酸异丙酯盐酸盐进行柱前衍生化，并结合特定的HPLC检测条件，从而实现L-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体D-丙氨酸异丙酯盐酸盐的分离与测定，并使该方法在系统适用性、专属性、线性和范围等方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于以L-丙氨酸异丙酯盐酸盐为起始原料或中间体制得的原料药或药品的质量控制。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种L-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体的分离方法，所述分离方法包括在碱性溶液的存在下，使用乙酰葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)溶液对L-丙氨酸异丙酯盐酸盐及其异构体进行衍生化，衍生化后的L-丙氨酸异丙酯盐酸盐及其异构体采用HPLC色谱法得到分离和检测。

优选地，所述碱性溶液为三乙胺溶液。

优选地，所述三乙胺溶液中包括三乙胺和乙腈溶液。