[发明专利]一种治疗中枢神经损伤的可注射水凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种治疗中枢神经损伤的可注射水凝胶的制备方法，

所述治疗中枢神经损伤的可注射水凝胶为：

以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸修饰过的多臂聚乙二醇-X与多臂聚乙二醇-Y通过点击化学反应得到用于病灶原位形成水凝胶支架的聚合物，所述聚合物还负载有纳米/微米粒子和细胞生长因子，所述纳米/微米粒子负载有免疫调控药物和/或抗氧化药物；

所述多臂聚乙二醇-X和多臂聚乙二醇-Y中发生点击化学反应的官能团对X与Y选自：巯基与马来酰胺基；

所述多臂聚乙二醇-X为4-臂聚乙二醇-X或3-臂聚乙二醇-X；所述多臂聚乙二醇-Y为4-臂聚乙二醇-Y或3-臂聚乙二醇-Y；

所述多臂聚乙二醇-X与多臂聚乙二醇-Y中聚乙二醇的聚合度n为1-1000，

所述方法包含以下步骤：

步骤1：高分子纳米粒子NP的合成：在反应容器中，将甲基丙烯酸2-二甲氨基乙酯、苯乙烯、丙烯酸酯-聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯、4-乙烯基苯磺酸钠、N，N'-亚甲基双丙烯酰胺加入水中，然后加入氧化还原引发剂过硫酸钾和焦亚硫酸钠，在温度为50±10℃、氮气保护和搅拌下聚合反应3h以上，通过透析膜去除未反应完的单体得到纳米粒子NP；

步骤2：在纳米粒子NP的表面修饰马来酰亚胺：继续加入摩尔比为1:1~1.1的MAL-NH2和丙烯酸酯-聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯，在搅拌下进行马来酰亚胺改性反应至少1h，继续通过透析膜去除未反应完单体并冻干，得到冻干的马来酰亚胺改性纳米粒子NP-MAL；

步骤3：NP-MAL粒子负载MPSS：在MPSS的PBS溶液中，加入上述得到的纳米粒子NP-MAL并静置过夜，然后经过离心收集处理得到负载MPSS的纳米粒子，并经过冻干处理得到负载MPSS的纳米粒子MM-NPs；

步骤4：生长因子GFs的马来酰亚胺改性：将生长因子GFs按照1:30~70的摩尔比与sulfo-SMCC混合反应，得到马来酰亚胺改性的生长因子GF-MAL；

步骤5：将4a- PEG-MAL和RGD-PEG-SH按1:1摩尔比混合，得到RGD修饰过的4a-PEG-MAL，然后加入步骤3得到MM-NPs纳米粒子与步骤4得到的马来酰亚胺改性的生长因子GF-MAL并混合均匀形成溶液A；

步骤6：溶液B的制备：将 4a-PEG-SH溶于缓冲溶液，混合均匀形成溶液B；

步骤7：将步骤5与步骤6中的溶液A和B按1:1比例混合反应，即得到偶联负载药物的纳米粒子与细胞生长因子的可注射水凝胶MPG-HD，

上述中，MPSS代表甲基强的松龙琥珀酸钠，MAL-NH2表示1-（2-氨基乙基）-1H-吡咯-2,5-二酮盐酸盐，PEG表示乙二醇，4a-PEG-MAL表示4-臂聚乙二醇-马来酰亚胺，4a-PEG 表示4-臂聚乙二醇，RGD表示精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸，SH表示硫醇，MM-NPs表示马来酰亚胺改性MPSS负载纳米粒子，GF表示生长因子。

2.根据权利要求1所述治疗中枢神经损伤的可注射水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤1聚合反应中各反应物浓度为5%甲基丙烯酸2-二甲氨基乙酯、10%苯乙烯、3%丙烯酸酯-聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯、0.4%4-乙烯基苯磺酸钠、0.4% N，N'-亚甲基双丙烯酰胺、0.2%过硫酸钾和0.1%焦亚硫酸钠，以上浓度单位为w/v。

3.根据权利要求1所述治疗中枢神经损伤的可注射水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤3中的载药纳米/微米粒子通过偶联反应负载在水凝胶上。

4.根据权利要求1所述治疗中枢神经损伤的可注射水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤4中生长因子通过偶联反应负载在水凝胶上。

5.根据权利要求1所述治疗中枢神经损伤的可注射水凝胶的制备方法，其特征在于，所述纳米/微米粒子选自反应基团修饰过的高分子微米/纳米粒子和/或脂质体中一种或多种的混合。

6.根据权利要求1所述治疗中枢神经损伤的可注射水凝胶的制备方法，其特征在于，所述纳米/微米粒子采用聚乙烯、明胶、胶原、聚乳酸或脂质体粒子中的一种或多种的混合。