[发明专利]与栽培种来源抗桃绿蚜性状紧密连锁的分子标记、引物、应用及品种选育方法

权利要求书

1.一种与栽培种来源抗桃绿蚜性状紧密连锁的分子标记，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的5’端起第72-91位的插入或缺失。

2.如权利要求1所述的分子标记在桃抗蚜品种选育中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，对权利要求1所述的分子标记的基因型进行检测，当SEQ ID NO.1所示序列的5’端起第72-91位为插入纯合基因型时，待测样本为感蚜性状；当SEQ ID NO.1所示序列的5’端起第72-91位为缺失纯合基因型时，待测样本为抗蚜性状；当SEQ ID NO.1所示序列的5’端起第72-91位为插入或缺失杂合基因型时，待测样本为抗蚜性状。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过PCR扩增检测SEQ ID NO.1所示序列5’端起第72-91位插入或缺失，所述PCR扩增采用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2及SEQ IDNO.3所示。

5.用于检测权利要求1所述分子标记的引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNO.2及SEQ ID NO.3所示。

6.一种桃抗蚜品种选育方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将栽培种来源的桃绿蚜抗性品种作为亲本或亲本之一进行杂交育种；

2)提取获得的杂交后代基因组DNA作为待测样本；

3)以基因组DNA为模板，对覆盖权利要求1所述分子标记的区域设计引物并进行PCR扩增；

4)根据PCR扩增产物的基因型判定待测样本抗蚜性状并筛选出抗蚜单株：当SEQ IDNO.1所示序列的5’端起第72-91位为插入纯合基因型时，待测样本为感蚜性状；当SEQ IDNO.1所示序列的5’端起第72-91位为缺失纯合基因型时，待测样本为抗蚜性状；当SEQ IDNO.1所示序列的5’端起第72-91位为插入或缺失杂合基因型时，待测样本为抗蚜性状。

7.根据权利要求6所述的桃抗蚜品种选育方法，其特征在于，所述步骤2)中PCR扩增采用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2及SEQ ID NO.3所示。

8.根据权利要求7所述的桃抗蚜品种选育方法，其特征在于，所述步骤2)中PCR扩增的反应体系如下：10×PCR Buffer 5μL，dNTP Mixture 1μL，Mg²⁺4μL，上游引物1μL，下游引物1μL，50ng/μl基因组DNA 2μL，DNA Polymerase 0.5μL，灭菌水35.5μL，总体积50μL；下游引物和上游引物在反应体系中的终浓度均为0.2μM。

9.根据权利要求8所述的桃抗蚜品种选育方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序如下：预变性95℃，3min；进入PCR扩增循环，每个循环依次经过98℃，30s变性，57℃，30s复性，72℃，30s延伸，共循环38次，最后72℃，7min，完成PCR的扩增。

10.根据权利要求6所述的桃抗蚜品种选育方法，其特征在于，所述步骤4)中通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物条带大小，以判断SEQ ID NO.1所示序列的5’端起第72-91位是否缺失。