[发明专利]一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法

说明书

一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法。本申请涉及一种抗体；它的重链、轻链；相应的可变域以及相应的互补决定域；以及在BA‑ELISA分析中使用该抗体作为二抗所建立的酶联免疫分析方法。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种定量检测血清中抗人白介素17 单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法。

背景技术

白介素17(IL-17)也称为CTLA-8或IL-17A，是促炎细胞因子，其刺激诸如成纤维细胞、角质细胞、上皮和内皮细胞、滑膜细胞等非免疫细胞分泌 IL-6、IL-8、PGE2、MCP-1、CXCL-1和G-CSF等多种细胞因子，并且还具有诱导ICAM-1表面表达、T细胞增殖等生物学效应。IL-17A主要由一类激活的称之为Th17的CD4+T细胞产生并通过结合IL-17RA和IL-17RC的复合物而发挥作用(Toy等，2006，J.Immunol.177(11)；36-39)。抗人白介素 17单克隆抗体为特异性结合人白细胞介素17A(IL-17A)的IgG1κ型人源化单克隆抗体；其亲本抗体由经人IL-17A免疫的新西兰兔B细胞筛选获得，亲本兔抗经人源化改造后得到抗人白介素17单克隆抗体。

本申请中待检测的抗人白介素17单克隆抗体是江苏荃信生物医药有限公司的QX002N，该抗人白介素17单克隆抗体在中国专利文献CN 108640991 B中有所描述。具体来说，过高表达的IL-17A可引起诸多炎症疾病：如IL-17A作用于巨噬细胞，DC细胞，诱发IL-1，IL-6，TNF，CRP 的高表达，导致炎症反应，参与银屑病和移植排斥的病理过程；IL-17A作用于内皮细胞，诱发IL-6，MMP，凝血因子的高表达，导致血管活化，参与再灌注损伤、血栓和动脉粥样硬化的病理过程；IL-17A作用于成纤维细胞，诱发IL-6，趋化因子，生长因子，MMP的高表达，导致基质破坏，参与多发性硬化症、克罗恩病的病理过程；IL-17A作用于成骨细胞和软骨细胞，诱导RANKL、MMP、破骨细胞生成、导致骨侵蚀、软骨损伤，参与风湿性关节炎、牙周病的病理过程(N Engl J Med.2009Aug27；361(9):888-98.Nat Rev DrugDiscov.2012Oct；11(10):763-76.Semin Arthritis Rheum.2013Oct；43 (2):158-70.Trends Mol Med.2016Mar；22(3):230-41.)。IL-17A中和抗体可以抑制自身免疫性疾病患者体内高表达IL-17A，并降低重要炎症因子IL-6的产生(Chabaud M,Durand JM,BuchsN,et al.Arthritis Rheum.1999,42: 963-70)。很多自身免疫疾病的动物模型实验证明，使用抗体中和IL-17A，可有效抑制炎症的病理发展(Lubberts E,Koenders MI,Oppers-Walgreen B,et al.Arthritis Rheum.,2004,50:650-659)。目前，IL-17A相关抗体药物已经被批准上市，分别是Secukinumab(IL-17A靶向抗体，SEC)用于治疗斑块银屑病、强直性脊柱炎及银屑病关节炎、Ixekizumab(IL-17A靶向抗体，IXE)，用于治疗斑块银屑病及银屑病关节炎。江苏荃信生物医药有限公司开发了商品代号为QX002N的抗IL-17单克隆抗体作为药物使用。

对于药物而言，药代动力学是应用动力学原理与数学处理方法，定量描述药物在体内的动态变化规律，研究通过各种途径进入人体的药物，其吸收、分布、代谢、排泄的过程。因此药代动力学的研究将有利于评价药物的安全性和有效性。生物样品常用的分析方法包括色谱法和免疫法。色谱法灵敏度较低，试验过程繁琐，回收率不稳定。免疫法是以特异性抗原-抗体反应为基础的分析方法，是当前临床和非临床生物样品检测方法中最为常用的一种，由于抗人白介素17单克隆抗体是蛋白大分子，适合使用酶联免疫分析方法进行测定，而且生物素化兔抗抗人白介素17单克隆抗体作为第二抗体与检测抗体的结合使用，减少血清中无关蛋白的干扰。