[发明专利]一种用于检测昆虫细胞DNA残留的引物、试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 202011235318.X | 申请日： | 2020-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN112094928A | 公开（公告）日： | 2020-12-18 |
| 发明（设计）人： | 陈涛;王博玮;李雅雯 | 申请（专利权）人： | 天津科佰迪生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300000 天津市滨海新区洞庭路220*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 昆虫 细胞 dna 残留 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测昆虫细胞DNA残留的引物，其特征在于，其核苷酸序列如下所述：
正向引物序列：5’- CGCTGTAAGAGGACCGTAG -3’，
反向引物序列：5’- GACCTCACGCAATCTTCTGA -3’。
2.一种用于检测昆虫细胞DNA残留的试剂盒，其特征在于：包括2×Taqman MasterMix、标准品、DNA稀释液和引物探针混合物；
所述引物探针混合物包括引物对和Taqman探针，其中引物对的核苷酸序列如下所述：
正向引物序列：5’- CGCTGTAAGAGGACCGTAG -3’；
反向引物序列：5’- GACCTCACGCAATCTTCTGA -3’；
Taqman探针的核苷酸序列如下所述：
Taqman探针：5’- ACCGCTGCCTCCTCCTGCAGG -3’；
Taqman探针的5’端标记有荧光报告基团，其荧光报告基团为FAM，3’端标记有淬灭基团，其淬灭基团为MGB。
3.如权利要求2所述的一种用于检测昆虫细胞DNA残留的试剂盒，其特征在于：所述2×Taqman Master Mix包含Taq酶、dNTPs、Mg2+、BSA、UNG酶和PCR反应缓冲液。
4.如权利要求2所述的一种用于检测昆虫细胞DNA残留的试剂盒，其特征在于：所述标准品为昆虫细胞基因组DNA。
5.一种用于检测昆虫细胞DNA残留的方法，其特征在于：采用实时荧光定量PCR法，其反应程序为: 50℃ 2min，95℃ 预变性10min；95℃ 10sec，60℃ 1min，45个循环；根据所得标准曲线，计算待检样本中昆虫细胞DNA残留量。
6.如权利要求5所述的一种用于检测昆虫细胞DNA残留的方法，其特征在于：所述方法的检测样本为以昆虫细胞为表达宿主细胞进行生产的重组蛋白或重组病毒类疫苗或基因治疗载体。
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