[发明专利]一种免抽提的核酸检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种免抽提的核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将含有待检测核酸的生物样本放在多功能缓冲液中进行裂解，释放出待检测核酸；

（2）将含有释放的待检测核酸的多功能缓冲液加入检测试剂进行待检测核酸的复制反应；

（3）反应完成后根据检测结果判断样本中是否含有待检测核酸；

所述的含有待检测核酸的生物样本为病毒；

所述的多功能缓冲液具有裂解失活生物样本，促进待检测核酸释放，以及作为待检测核酸复制和检测过程所需缓冲液的作用；

所述的检测试剂包含待检测核酸复制扩增所需要的各种酶、引物、以及辅助因子；或者还含有用于待检测核酸复制扩增产物检测所需要的各种辅助因子；

每100µL检测体系中含有以下含量成分的多功能缓冲液：18mM-22mM pH8.0的Tris-HCl，2%-4% 曲拉通X-100，2%-4% Tween20，100mM-140mM 甜菜碱，80ug/mL-120ug/mL BSA，0.1%-0.7% SDS,0.1%-0.5% 乙醇，130mM-170mM 氯化钠，30mM-70mM 氯化钾，22mM-28mM 氢氧化钠，280nM-320nM 莎梵婷。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的检测试剂包含耐热的能结合寡核苷酸引物的重组酶、特异性引物、耐热的链置换DNA聚合酶、耐热的单链DNA结合蛋白。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，每100µL检测体系中含有以下含量成分的检测试剂：1uM-1mM 耐热的能结合寡核苷酸引物的重组酶、100nM-20uM特异性引物、0.5U-50U耐热的链置换DNA聚合酶、1nM-1mM耐热的单链DNA结合蛋白。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，检测试剂还含有：ATP-γ-S、醋酸镁和dNTP；如果检测目标核酸是RNA，则还含有逆转录酶、RNases抑制剂。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的用于待检测核酸复制扩增产物检测所需要的各种辅助因子为CRISPR-Cas12b检测报告系统。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于， CRISPR-Cas12b检测报告系统包括：Aap Cas12b、Aap Cas12b sgRNA和单链报告DNA。

7.根据权利要求1-6任一项所述的检测方法，其特征在于，所述的检测试剂在使用前制作成冻干粉。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，

将生物样本放在多功能缓冲液中，通过42℃-72℃加热2min-30min；能够将生物样本裂解，释放出待检测核酸；

将含有释放的待检测核酸的多功能缓冲液加入检测试剂中，在42℃-72℃反应2min-30min，判断样本中是否含有待检测核酸。

9.一种免抽提的核酸检测试剂盒，其特征在于，包括：多功能缓冲液和检测试剂；

所述的多功能缓冲液具有裂解失活生物样本，促进待检测核酸释放，以及作为待检测核酸复制和检测过程所需缓冲液的作用；所述的检测试剂包含待检测核酸复制扩增所需要的各种酶、引物、以及辅助因子；或者还含有用于待检测核酸复制扩增产物检测所需要的辅助因子；

每100µL检测体系中含有以下含量成分的多功能缓冲液：18mM-22mM pH8.0的Tris-HCl，2%-4% 曲拉通X-100，2%-4% Tween20，100mM-140mM 甜菜碱，80ug/mL-120ug/mL BSA，0.1%-0.7% SDS,0.1%-0.5% 乙醇，130mM-170mM 氯化钠，30mM-70mM 氯化钾，22mM-28mM 氢氧化钠，280nM-320nM 莎梵婷。