[发明专利]一种新型N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶检测试剂

说明书

一种用于检测N‑乙酰‑β‑D氨基葡萄糖苷酶的试剂，所述检测试剂由R1和R2组成。所述试剂R1为：缓冲液，VRA‑NAG，BSA，氯化镁，EDTA·2Na，Trixon‑X100，SDS，亚硫酸钠，聚乙二醇6000，乙二醇，葡萄糖，β环糊精，冠18醚，防腐剂；试剂R2中含有缓冲液，吐温20，尿素，BSA，防腐剂。本发明首次使用镁离子作为底物螯合剂，镁离子与具有环状结构的VRA‑NAG螯和形成六原子环的螯合物，增强了试剂的稳定性。

技术领域

本发明涉及一种新型N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶检测试剂。

背景技术

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-Acetyl-β-D-Glucosaminidase，NAG)，又称尿酶，是分子量为140kD的一种存在于细胞溶酶体内的酸性水解酶，在人体内主要存在于肾的近曲小管上皮细胞中。研究表明，NAG对肾小管损伤的反应非常灵敏，比其他尿中低分子蛋白更迅速、直接地反应肾小管活动性损伤的程度和病情变化，但在健康人尿中含量甚微。此外，用尿作标本，又是一种无创伤性检查，符合当代医学检验方法的潮流，适合于日常检验和连续动态分析。由此可见，通过测定尿中NAG的活性，对糖尿病，各种肾实质疾患，药物及重金属肾中毒，尿路感染(肾盂肾炎)，移植肾排斥反应，高血压及自身免疫性疾病等原因造成的肾小管损伤早期检测具有重要的临床应用价值。

目前，NAG活性检测方法有放免分析法、荧光分析法和可见分光光度法等。其中放免分析法和荧光分析法所需仪器价格昂贵，且对底物溶液配制的要求较高而不适用于临床大流量的自动化分析；而在已报道的分光光度法中，均存在底物溶解性差或试剂稳定性欠佳等问题，难以满足临床检验要求。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明提供了一种稳定性好、灵敏度高、无需复溶直接使用的检测试剂及检测方法。

一种N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶的检测试剂，所述检测试剂是由试剂R1和试剂R2两个试剂组成，

所述试剂R1包括以下浓度的组分:

所述试剂R2包括以下浓度的组分：

作为优选，所述底物为5-[4-(3-甲氧基-苯甲烯)]-饶丹宁-3-乙酸铵-N-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷(VRA-NAG)。

进一步的，所述的BSA是牛血清白蛋白，SDS是十二烷基硫酸钠，EDTA·2Na是乙二胺四乙酸二钠。

作为优选，所述防腐剂为叠氮钠、NaN₃、对羟基苯甲酸甲酯中的一种。

进一步的，所述的尿液N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶检测试剂，其中R1缓冲液为15～30℃，pH为4.0～6.0的柠檬酸缓冲液。

进一步的，所述的尿液N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶检测试剂，其试剂R2中缓冲液为15～30℃，pH为11.0～12.0的碳酸盐缓冲液。

进一步的，所述的尿液N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶检测试剂来检测尿液N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶的检测方法，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。

进一步的，试剂R1和试剂R2的比例为3:1。

本发明的基本原理如下：

尿液中的N-乙酰-β-D葡萄糖苷酶在酸性环境下将试剂中的5-[4-(3-甲氧基-苯甲烯)]-饶丹宁-3-乙酸铵-N-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷(VRA-NAG)催化水解为5-[4-(3-甲氧基-苯甲烯)]-饶丹宁-3-乙酸铵(VRA)，接着VRA在强碱性环境下变构产生荧光，溶液呈现紫红色，并在505nm的波长处有吸收峰，通过检测505nm波长处吸光度的变化可以确定N-乙酰-β-D葡萄糖苷酶的活性。