[发明专利]一种猪塞内卡病毒疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种猪塞内卡病毒疫苗及其制备方法。本发明所述利用猪塞内卡病毒SVV‑SD‑2018分离毒株用于猪塞内卡灭活疫苗的制备，该毒株的ORF具有独特的氨基酸位点排列，大大增强了对悬浮细胞株BHK的感染力，产毒效率高且具备良好的免疫原性。将SVV‑SD‑2018株经悬浮细胞BHK进行增殖、并经纯化的抗原、加入佐剂制备成猪塞内卡病毒灭活疫苗。疫苗安全、效力试验结果显示：使用本发明的灭活疫苗免疫猪后无不良反应，且均能产生良好的保护力。结果说明利用本发明的毒株制备的疫苗安全有效，可用于预防猪塞内卡病的发生。

技术领域

本发明涉及一种猪塞内卡病毒疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

塞内卡病毒(Seneca Valley Virus，SVV)属于小RNA病毒科，塞内卡病毒属。临床症状以鼻部、蹄部出现水泡及溃烂为主，与FMDV、VSV和SVD感染症状相似；感染仔猪有一定的死亡率(30％～70％)。

2002年首次于美国发现，随后世界范围内几乎同时暴发该病，证明其有进一步扩大暴发范围的可能性，尤其作为新发病，没有相应的疫苗和适当的治疗措施，一旦发生流行，造成的后果难以估计。因此，该病的疫苗研究迫在眉睫，应用市场广泛。

2015年，广东猪场大面积出现水泡样症状，排除FMDV和SVD感染后PCR检测SVV阳性，并成功分离到SVV病毒。2016-2018年，国内其他省份也陆续有发病报道(湖北、福建、河南、山东、黑龙江、浙江等地)。猪塞内卡病毒病目前在我国多个省份集中暴发，并且这种暴发也出现在世界不同国家和地区，预示该病十分有可能造成全球范围内的大规模发病或流行。该病与口蹄疫等水泡性疾病从临床症状上难以区分，既能够造成直接的经济损失，也为口蹄疫的防控带来重大干扰。因此，若大规模发病，对养猪业造成的危害是难以估量的。猪塞内卡病毒感染仔猪可导致较高的死亡率(最高可达70％)，病情恢复之后也会因为临床病变导致增重迟缓。因此研发高效的塞内卡病毒灭活疫苗能够有效预防和降低塞内卡病毒对我国养猪业的危害，同时还能够为口蹄疫的防控甚至净化起到重大辅助作用。

发明内容

本发明的目的在于利用本发明人自行分离、保存的一株塞内卡病毒，经BHK-21细胞悬浮培养，获得高抗原含量的病毒液，经纯化、灭活后配以适当佐剂配制灭活疫苗，用于预防猪的塞内卡病。此外，经研究发现，本发明的塞内卡病毒株开放阅读框(ORF)的氨基酸序列具有特殊性，并决定了该毒株的免疫原性，该特征包括：

1.SVV-SD-2018株塞内卡病毒ORF片段与现公开的SVV毒株比较存在特征性氨基酸位点排列；

2.SVV-SD-2018株塞内卡病毒ORF片段与国内SVV参考株相比，核苷酸序列同源性为95.9％～99.6％，编码的氨基酸序列同源性为98.5％～99.5％；

3.SVV-SD-2018株塞内卡病毒ORF片段与国外SVV参考株相比，核苷酸序列同源性为93.4％～98.5％，编码的氨基酸序列同源性为97.7％～99.4％。

本发明的技术方案

1.一种猪塞内卡病毒疫苗，其特征在于该疫苗含有SVV-SD-2018株塞内卡病毒；该株病毒已于2020年10月30日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No.20715；

所述SVV-SD-2018株病毒的ORF片段存在特征性氨基酸位点排列，导致病毒编码区域蛋白空间构象改变，大大增强了病毒对悬浮细胞株BHK-2014S的感染力并提高了产毒效率。