[发明专利]一种在大肠杆菌中表达的对硝基苯酚降解酶基因组及其应用

权利要求书

1.一种在大肠杆菌中表达的对硝基苯酚降解酶基因组，包括源于假单胞菌并按大肠杆菌的密码子偏好性优化后获得的PnpAS、PnpBS、PnpCS、PnpDS和PnpES基因。

2.根据权利要求1所述的对硝基苯酚降解酶基因组，其特征在于，按大肠杆菌的密码子偏好性优化后，所述PnpAS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；PnpBS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；PnpCS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；PnpDS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；PnpES基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

3.如权利要求1或2所述对硝基苯酚降解酶基因组在大肠杆菌中的应用。

4.一种多基因大肠杆菌转化载体，包括大肠杆菌表达载体，以及源于假单胞菌并按大肠杆菌的密码子偏好性优化后获得的PnpAS、PnpBS、PnpCS、PnpDS和PnpES基因分别与T7启动子和终止子融合的基因表达盒。

5.根据权利要求4所述的多基因大肠杆菌转化载体，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体为pET-28a。

6.一种可完全降解对硝基苯酚的转基因大肠杆菌的获得方法，包括以下步骤：

1)根据大肠杆菌的密码子偏好性，对源于假单胞菌的PnpA基因、PnpB基因、PnpC基因、PnpD基因和PnpE基因按大肠杆菌表达模式优化，优化后分别获得PnpAS基因、PnpBS基因、PnpCS基因、PnpDS基因和PnpES基因，利用重叠延伸PCR技术，将优化后的五段基因分别与T7启动子和终止子融合，分别构建基因表达盒；

2)将步骤1)中构建的五个基因表达盒依次按顺序连接入大肠杆菌表达载体，获得含PnpAS、PnpBS、PnpCS、PnpDS和PnpES五基因表达盒的多基因大肠杆菌转化载体；

3)将步骤2)所述多基因大肠杆菌转化载体转入大肠杆菌，获得可完全降解对硝基苯酚的大肠杆菌。

7.根据权利要求6所述的获得方法，其特征在于，所述PnpAS基因的核苷酸序列如SEQID No.1所示；PnpBS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；PnpCS基因的核苷酸序列如SEQID No.3所示；PnpDS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；PnpES基因的核苷酸序列如SEQID No.5所示。

8.根据权利要求6或7所述的获得方法，其特征在于，步骤1)中，所述T7启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述T7终止子序列如SEQ ID NO.7所示。

9.根据权利要求6或7所述的获得方法，其特征在于，步骤2)中，所述大肠杆菌表达载体为pET-28a。

10.根据权利要求6所述的获得方法，其特征在于，步骤3)中，所述大肠杆菌为BL21-AI。