[发明专利]一种载EBV-LMP2 mRNA的核-壳纳米粒的制备方法及应用

说明书

本发明属于医药领域，具体涉及一种载EBV‑LMP2 mRNA的核‑壳纳米粒的制备方法及应用，所解决的技术问题是提供一种具有抗癌治疗效果好、毒副作用小的载EBV‑LMP2 mRNA的核‑壳纳米复合物，它是以载有EBV‑LMP2 mRNA为原料，与载体结合后，可有效递送至细胞内表达相应的蛋白进而激发免疫治疗的效果，对EBV病毒引起的疾病的治疗效果明显，为临床有效应用EBV‑LMP2 mRNA提供了一种新的选择。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种载EBV-LMP2 mRNA的核-壳纳米粒及其制备方法和应用。

背景技术

根据国际癌症研究机构的数据，2018年，鼻咽癌新发病例约为12.9万例，占2018年全部确诊病例的0.7％。然而，其全球分布极不平衡，在东亚和东南亚尤为普遍，占新发病例的70％以上。男性鼻咽癌发病率高于女性，2015年中国鼻咽癌发病率比例约为2.5。鼻咽癌以其独特的地理分布为特征，鼻咽癌在生物学、流行病学、组织学、自然史以及治疗反应等方面均不同于其他头颈癌，因而鼻咽癌的治疗有其特殊性。这些发现表明，遗传、种族和环境因素的结合可能会影响鼻咽癌的发病机制。

放疗是目前治疗鼻咽癌的主要手段，也是未播散的鼻咽癌治疗的基本方式。由于鼻咽部解剖的特殊性，手术不适用于鼻咽癌的初治。但放疗对机体的非特异性损伤巨大。局部复发和远处转移是鼻咽癌治疗失败的两个原因。因此，在常规治疗的基础上迫切需要寻找新的综合治疗手段，近几十年来，随着分子生物学和肿瘤免疫学的研究进展，使用分子生物学手段提高患者细胞免疫，预防鼻咽癌复发和转移并作为传统治疗方法的补充，已受到人们越来越多的重视。

在恶性肿瘤中病毒性抗原是最具有免疫原性的分子，并且是保护性肿瘤免疫中最具显著意义的肿瘤抗原，EB病毒作为疱疹病毒科成员，是第一个被发现的与人类肿瘤有关的病毒。现已明确EB病毒是导致鼻咽癌、淋巴瘤及免疫抑制后淋巴瘤的主要病因之一。EB病毒表达的潜在膜蛋白LMP1、LMP2发挥多重致瘤作用，可通过激活多重信号转导以及调控各种致肿瘤基因的表达发挥作用。在治疗性疫苗方面，EBV核抗原 EBNA1、潜伏膜抗原LMP1和LMP2是主要的治疗靶点。

LMP2是鼻咽癌等EB病毒相关肿瘤的组织中持续表达的病毒蛋白之一，并且不引起B淋巴细胞转化，体内外研究已证明EB病毒LMP2基因可很好的诱导产生特异性细胞免疫应答。因此，LMP2成为在诱导EB病毒特异性细胞免疫应答、预防和治疗相关肿瘤的良好靶抗原。为引发针对LMP2的特异性细胞免疫应答，就必须首先选择一个适合治疗应用的LMP2表达系统。

目前针对LMP2的疫苗，只有多肽、DNA疫苗及CTL细胞治疗处于临床研究阶段，而mRNA疫苗未见文献报导。

发明内容

有鉴于此，本发明目的之一在于提供一种用于治疗EBV病毒引起的各类疾病的载EBV-LMP2 mRNA的核-壳纳米粒，该核-壳纳米粒能有效递送EBV-LMP2 mRNA到细胞内表达相应的蛋白，激发相关免疫，发挥免疫治疗的效果。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

一种载EBV-LMP2 mRNA的核-壳纳米粒，其特征在于，它是由载有表达EBV-LMP2mRNA与核-壳纳米粒形成的纳米复合物；其中，核-壳纳米粒中纳米粒和脂质的质量比为0.1～5∶1。

优选的，所述的载EBV-LMP2 mRNA的核-壳纳米粒，其特征在于：核-壳纳米粒中纳米粒和脂质的质量比为0.5～3∶1。

进一步优选的，所述的载EBV-LMP2 mRNA的核-壳纳米粒，其特征在于：核-壳纳米粒中纳米粒和脂质的质量比为1～2.5∶1。

本发明的另一目的在于提供载EBV-LMP2 mRNA的核-壳纳米粒的制备方法，该方法制备的核-壳纳米粒具有粒径均一、包封率高、稳定性好等优点。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：