[发明专利]一种用于检测产品皮肤刺激性的蛋白芯片及其应用

权利要求书

1.一种用于检测产品皮肤刺激性的蛋白芯片，其特征在于，包括刺激性接触性皮炎通路靶点蛋白检测孔、组胺依赖痒觉通路靶点蛋白检测孔、非组胺依赖痒觉通路靶点蛋白检测孔和空白孔；

所述刺激性接触性皮炎通路靶点蛋白为IL-1、IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、CXCL8、IgE、VEGF和MCP-1；

所述组胺依赖痒觉通路靶点蛋白为CGRP和histamine；

所述非组胺依赖痒觉通路靶点蛋白为PAR2、TRPA1和TRPV1；

以上述靶点蛋白对应的抗体作为配基，将其有序地固定在玻璃载体或膜载体的表面形成蛋白芯片。

2.根据权利要求1所述蛋白芯片，其特征在于，每个靶点蛋白检测孔为2-3个重复点。

3.权利要求1或2所述蛋白芯片在检测产品对皮肤刺激性中的应用或在制备检测产品对皮肤刺激性的试剂盒中的应用；所述检测为非疾病诊断或治疗目的的检测。

4.一种非疾病诊断和治疗目的检测产品对皮肤刺激性的方法，其特征在于，包括：

步骤1、将受试产品与皮肤接触，然后将接触的皮肤组织提取蛋白；

步骤2、提取的蛋白加入到权利要求1或2所述蛋白芯片的检测孔和空白孔中利用免疫荧光技术检测表达量，通过软件分析，分别计算各检测孔相对于空白孔，靶点蛋白表达含量变化的差异，计算Pvalue值，其中P＜0.05为显著差异计为1分，P＜0.01为极显著差异计为2分，没有差异计为0分，负反馈显著差异计为-1分，获得各靶点蛋白的表达显著性评分；

步骤3、将各靶点蛋白的表达显著性评分带入以下公式，计算受试产品的综合评分P：

H_j=（∑_ih_i）/i

P=∑_jH_jK_j

其中，i为（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）通路中靶点蛋白的个数，i=1,2,3…，h_i为每个通路中各靶点蛋白的评分；j=（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）,H_j为（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）通路中靶点蛋白的平均分，K_j为（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）通路的权重系数；所述（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）通路依次为刺激性接触性皮炎通路、组胺依赖痒觉通路、非组胺依赖痒觉通路；

所述（Ⅰ）通路中靶蛋白的权重系数K_j为0.6，所述（Ⅱ）通路中靶蛋白的权重系数K_j为0.2，所述（Ⅲ）通路中靶蛋白的权重系数K_j为 0.2；

步骤4、空白孔为0分，相对于空白孔，受试产品综合评分的高低表明其刺激性的强弱。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述受试产品综合评分的刺激性强度评分标准如下：

0-0.7分，不含0.7分，为无刺激性；

0.7-2分，不含2分，为轻度刺激性；

2-5分，不含5分，为中度刺激性；

5分以上为强度刺激性。