[发明专利]一株干酪乳杆菌及其应用

说明书

一株干酪乳杆菌及其应用，涉及微生物领域，尤其涉及一株干酪乳杆菌及其应用。是要解决现有乳酸菌对于大肠杆菌的抑制效果不理想的问题。该菌株为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)R9，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期是2020年10月14日，保藏编号为CGMCC No.20888。本发明干酪乳酸菌R9对致病性大肠杆菌抑制效果能达到70％以上，说明干酪乳杆菌R9对致病性大肠杆菌有较好的拮抗作用，为调节家畜肠道菌群生态平衡微生物菌剂或添加剂的开发奠定了良好的基础。本发明用于抑制致病性大肠杆菌。

技术领域

本发明涉及微生物领域，尤其涉及一株干酪乳杆菌及其应用。

背景技术

致病性大肠杆菌是公共卫生学上一种重要的人畜共患病病原菌之一，是导致人、动物感染及全球食源性爆发的主要原因之一。据统计，每年全球超过1.6亿病例和100万例死亡。致病性大肠杆菌在家畜中的感染不仅造成重大的经济损失，而且对食品安全及人类健康构成威胁。研究表明，来自牛、羊等家畜的致病性大肠杆菌分离株可传染给人类致使患病。因此，若不能有效预防及治疗家畜肠道大肠杆菌引起的疾病，极有可能会随着食物链的传递危害人类的健康。

据研究，乳酸菌对肠道细菌如大肠杆菌引起的疾病具有治疗和保健作用，通过乳酸菌的生长繁殖产生乳酸、乙酸等有机酸，降低肠道微环境pH值，同时与生存环境中致病性大肠杆菌等有害微生物竞争底物，抑制有害微生物的生长。因此，运用高效抑制致病性大肠杆菌的乳酸菌来研制既能防治疾病又具备安全、无副作用的微生态制剂在畜牧业中具有广阔的发展潜力和应用前景。然而现有的乳酸菌对于大肠杆菌的抑制效果不理想，用于防治大肠杆菌引起的疾病效果较差。

发明内容

本发明是要解决现有乳酸菌对于大肠杆菌的抑制效果不理想的问题，提供一株干酪乳杆菌及其应用，该菌株能够高效抑制致病性大肠杆菌。

本发明干酪乳杆菌为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)R9，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2020年10月14日，保藏编号为CGMCC No.20888。

本发明干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)R9的菌落呈圆形，菌落大小为0.5～1.5mm，菌落表面隆起，边缘整齐，湿润，颜色为乳白色，味道偏酸。经镜检，该菌体呈短棒状，一般呈单个、成对或短链状。

本发明干酪乳杆菌R9在培养6h后进入对数生长期，24h时OD值达到最高峰，随后进入稳定期，菌株几乎停止生长，活菌数量和凋亡数量处于相对平衡状态。在生长24～48h时pH值为3.4，产酸能力较强。干酪乳杆菌R9的过氧化氢酶试验、硝酸盐还原试验、吲哚试验、硫化氢试验、明胶液化试验，结果均为阴性，

本发明干酪乳杆菌R9通过16S rDNA序列比对分析，与干酪乳酸菌属有极高的同源性，同源性为99％。通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果确定，本发明的菌株R9属于干酪乳酸菌属。

本发明还提供干酪乳杆菌R9在制备抑制大肠杆菌药物中的应用。

进一步的，所述大肠杆菌为大肠杆菌标准质控菌株ATCC 25922。

进一步的，抑制大肠杆菌的条件为30℃恒温培养培养72h。

进一步的，大肠杆菌的浓度为10⁵CFU/mL。

根据微生物对生境的适应性和特异性原理，本发明从家畜食用的青贮饲料中分离乳酸菌，再应用于家畜防治疾病方面，乳酸菌能更迅速定殖，形成优势菌群。因此从青贮牧草中筛选乳酸菌，选用具有高效抑制致病性大肠杆菌的乳酸菌菌株，是防治家畜由大肠杆菌引起的肠道疾病的重要保证。