[发明专利]一种刺梨果实愈伤组织诱导及促进其活性物质积累的培养方法

权利要求书

1.一种刺梨果实愈伤组织诱导及促进其活性物质积累的培养方法，其特征在于，步骤如下：将增殖培养后的刺梨果实愈伤组织接种到以下培养基中培养：MS+3.0-4.0 mg·L^-1TDZ+0.1 mg·L^-1 NAA+60 g·L^-1蔗糖或葡萄糖+适量琼脂，pH值为5.8-6.0，培养条件为：培养温度为25℃，光照时间为每天光照12h，光照强度为10-15µmol·m^-2·s^-1；

所述增殖培养采用的培养基为：MS+3.0 mg·L^-1 TDZ+0.1 mg·L^-1 NAA+30 g·L^-1蔗糖+适量琼脂，pH值为5.8-6.0；

增殖培养前还包括刺梨果实的消毒处理和诱导培养；

所述诱导培养使用的诱导培养基为：WPM固体培养基+0.1 mg·L^-1BA+1.0 mg·L^-1 2，4-D+30 g·L^-1蔗糖+适量琼脂，pH为5.8- 6.0。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述刺梨果实愈伤组织在MS+ 3.0-4.0 mg·L^-1 TDZ+0.1 mg·L^-1 NAA+60 g·L^-1蔗糖或葡萄糖+适量琼脂, pH值为5.8-6.0中的培养时间为25-30天。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述刺梨果实愈伤组织的增殖培养时间为25-30天，每隔25-30天对愈伤组织继代1次，继代次数≤5次。

4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述刺梨果实愈伤组织的增殖培养条件为：培养温度为25℃，光照时间为每天光照12h，光照强度为10-15µmol·m^-2·s^-1。

5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述刺梨果实的消毒处理过程如下：在超净工作台外，用干净的手术刀切去果实的内果皮和外果皮，将果肉切成1×0.5×0.3cm³的方块状，迅速切好后浸泡在蒸馏水中，以减少褐化；在超净工作台内，先将准备好的外植体用75%的酒精浸泡40s，用无菌蒸馏水冲洗3次，再用0.1%的升汞分两次浸泡，总共浸泡6min，用无菌蒸馏水冲洗5次后，备用，消毒好的外植体损害的表面部位呈现白色，切去后露出黄色的果肉，将外植体切成片状，即可进行后续的诱导培养。

6.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，诱导培养的条件为：黑暗条件下，25℃培养。