[发明专利]一种诱导七叶一枝花愈伤组织直接成苗的培养基及方法

权利要求书

1.一种诱导七叶一枝花愈伤组织直接成苗的培养基，其特征在于：

所述培养基由改良MS培养基和诱导剂，以及壮苗生根剂组成；

所述改良MS培养基的组成成分为：

硝酸钾1900，硫酸铵1500～5000，七水硫酸镁370，磷酸二氢钾170，无水氯化钙330，四水硫酸锰22.3，硫酸锌8.6，硼酸6.2，碘化钾0.83，钼酸钠0.25，五水硫酸铜0.025，氯化钴0.025，乙二胺钠37.3，硫酸亚铁27.8，肌醇100，甘氨酸2，烟酸 0.5，盐酸吡哆醇0.5，盐酸硫胺素0.6～2.4，活性炭50～100，葡萄糖5000～6000 ，蔗糖25000～30000，琼脂 4500～6000，单位为mg/L；

所述诱导剂为：PIC 0.2～1.0+6-BA 1.0～2.0 +NAA 0.05～0.2，单位为mg/L，pH5.8～6.5；

所述壮苗生根剂为：BS 0.01～0.2+IAA 0.2～0.5，单位为mg/L，pH5.8～6.5；

配制培养基，将改良MS培养基和诱导剂配制成半固体愈伤成苗培养基，并调节pH值为6.0，高压灭菌后备用；将壮苗生根剂使用真空过滤器灭菌后备用，培养后期加入。

2.根据权利要求1所述的诱导七叶一枝花愈伤组织直接成苗的培养基，其特征在于：所述诱导剂为：PIC 0.5+6-BA 2.0 +NAA 0.1，单位为mg/L，pH6.0。

3.根据权利要求1所述的诱导七叶一枝花愈伤组织直接成苗的培养基，其特征在于：所述壮苗生根剂为：BS 0.1mg/L+IAA 0.3 mg/L，pH6.0。

4.一种诱导七叶一枝花愈伤组织直接成苗的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）配制培养基

所述培养基由改良MS培养基和诱导剂，以及壮苗生根剂制成；

所述改良MS培养基的成分为：

硝酸钾1900，硫酸铵1500～5000，七水硫酸镁370，磷酸二氢钾170，无水氯化钙330，四水硫酸锰22.3，硫酸锌8.6，硼酸6.2，碘化钾0.83，钼酸钠0.25，五水硫酸铜0.025，氯化钴0.025，乙二胺钠37.3，硫酸亚铁27.8，肌醇100，甘氨酸2，烟酸 0.5，盐酸吡哆醇0.5，盐酸硫胺素0.6～2.4，活性炭50～100，葡萄糖5000～6000 ，蔗糖25000～30000，琼脂 4500～6000，单位为mg/L；

所述诱导剂为：PIC 0.2～1.0+6-BA 1.0～2.0 +NAA 0.05～0.2，单位为mg/L，pH5.8～6.5；

所述壮苗生根剂为：BS 0.01～0.2+IAA 0.2～0.5 ，单位为mg/L，pH5.8～6.5；

配制培养基，将改良MS培养基和诱导剂配制成半固体愈伤成苗培养基，并调节pH值为6.0，高压灭菌后备用；

将壮苗生根剂使用真空过滤器灭菌后备用，培养后期加入；

（2）在超净工作台上，将获得的七叶一枝花愈伤组织瓶苗，用75%的酒精灭菌，打开培养瓶的瓶盖，将愈伤组织切成2～3cm的小块，分别接入灭菌过的愈伤成苗培养基中，每瓶接入1块；

接种好后放入培养室中培养，先暗培养5～7天，愈伤组织萌发出小芽时，再进行光照培养，光照培养15～20天，可见丛生芽，培养基底部有部分小芽有细长的白色根长出；

（3）在超净工作台上，将步骤（2）中长有小芽的培养瓶的表面用75%的酒精灭菌，打开培养瓶的瓶盖，将灭菌过的壮苗生根剂加入培养瓶中，每瓶加入0.5～2ml，盖好盖子，继续将培养瓶放入培养室进行光照培养，培养20～30 天，丛生芽上每个小芽的基部都长出粗壮的根，芽与芽之间的愈伤已经分化成幼嫩的根状茎，炼苗出瓶。

5.根据权利要求4所述的诱导七叶一枝花愈伤组织直接成苗的培养方法，其特征在于：步骤（2）和（3）所述培养室的培养条件为：温度 24～26℃，光照时间为12h/天，光照强度为2000 lx，湿度60～70%。