[发明专利]用于结核分枝杆菌检测的组合蛋白及检测试剂

说明书

本发明提出了一种用于结核分枝杆菌检测的组合蛋白及检测试剂，所述组合蛋白为由TBCG_03312蛋白或TBCG_03312蛋白部分氨基酸与Rv1681抗原蛋白的B细胞抗原决定簇、Rv1932抗原蛋白的B细胞抗原决定簇、Rv1956抗原蛋白的B细胞抗原决定簇以及Rv3368c的B细胞抗原决定簇中的任意两个或以上通过软性接头组合形成的组合蛋白。形成的组合蛋白具有更强的敏感性和特异性，将组合蛋白应用于快速检测方法中能够更精确地、更快速针对疑似活动性结核病人的血清进行检测，以快速、准确的辅助对活动性结核病人诊断和治疗，提高结核病患者的治愈率，避免结核病的传播。

技术领域

本发明属于医学免疫检测技术领域，特别涉及一种用于结核分枝杆菌检测的组合蛋白及检测试剂。

背景技术

尽管有90年的疫苗接种和60年的化疗史，结核病仍然是世界上因传染而死亡的主要原因，自2007年以来一直位居单一传染性疾病死因之首。世界卫生组织估计，全球结核潜伏感染人群约17亿，占全人群的1/4左右。2018年约有1040万新发病例，170万人死于结核病。这些新病例中有三分之一(约300万人)仍不为卫生系统所知，许多人没有得到适当的治疗。

只要及时诊断和正确治疗，几乎所有的药敏性肺结核患者都能治愈，但从疾病开始诊断到确诊开始治疗之间的时间通常是漫长的，这种延误造成了疾病传播。结核病的临床诊断对于结核病的早发现和早治疗具有重要意义。

随着科学技术的进步，结核分枝杆菌检测技术也有了突飞猛进的发展，新的血清学检测技术、细胞学检测技术(基于流式细胞仪的细胞分型实验、γ-干扰素释放实验)以及基于核酸扩增试验的分子生物学检测技术都在临床上得以应用。不管结核病诊断的新奇和即兴技术的发展如何，病原菌的涂片染色镜检和分离培养依然是活动性结核病的最可靠和首选诊断方法，特别是对于发展中国家的资源限制的情况下。但涂片染色镜检方便但不敏感，国外报道成人结核病病例抗酸染色灵敏度能达到50％，国内报道更低，灵敏度为10-30％。分离培养法检查往往需4-8周或更长的时间，常延误临床的诊断和治疗。因此，快速、准确的辅助检测方法仍然是必要的。

在近年来出现的新的诊断方法中，γ-干扰素释放实验和Xpert-MTB/RIF试验最受关注，Xpert-MTB/RIF是一种自动化的脱氧核糖核酸(DNA)扩增试验，可快速、灵敏地检测结核分枝杆菌和利福平的耐药性。该系统集成了样本处理和实时聚合酶链反应，可供相对不熟练的医疗保健工作者使用，并在两小时内提供结果，但这个系统非常昂贵，推广困难。γ-干扰素释放实验检测灵敏度高，但用该方法检测时，需要二次刺激，引起免疫记忆细胞反应，不仅是结核患者，凡是感染过结核分枝杆菌的人(包括潜伏感染者和治愈患者)，检测结果都是阳性，需要进一步排除。

发明内容

基于此，针对传统的分离培养法检查往往需要较长检测周期，延误临床的诊断和治疗，而γ-干扰素释放实验检测结果需要进一步排除，Xpert-MTB/RIF试验价格昂贵推广困难的技术问题，本发明提出了一种用于结核分枝杆菌检测的组合蛋白及检测试剂。

本发明提出的一种用于结核分枝杆菌检测的组合蛋白，所述组合蛋白为由TBCG_03312蛋白或TBCG_03312蛋白部分氨基酸与Rv1681抗原蛋白的B细胞抗原决定簇、Rv1932抗原蛋白的B细胞抗原决定簇、Rv1956抗原蛋白的B细胞抗原决定簇以及Rv3368c的B细胞抗原决定簇中的任意两个或以上通过软性接头组合形成的组合蛋白。

在其中的一个实施例中，所述TBCG_03312蛋白部分氨基酸为所述TBCG_03312蛋白C端109个氨基酸。

在其中的一个实施例中，所述组合蛋白包括第一组合蛋白和/或第二组合蛋白，所述第一组合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述第二组合蛋白的核苷酸序列如SEQID NO:2所示。

在其中的一个实施例中，利用所述组合蛋白作为抗原用于制备与所述抗原对应的抗体。