[发明专利]能产生稳定油包水型小液滴用于数字化PCR灵敏检测的硅油配方

说明书

本发明公开了一种能产生稳定油包水型小液滴用于数字化PCR灵敏检测的硅油配方，用于液滴包裹的硅油成分为DOWSIL^TM RSN‑0749 Fluid(Dow Corning)和黏度为20mPa.s二甲基硅油。本发明的硅油配方用于油包水型液滴，此硅油配方适用小液滴制作，小液滴直径尺寸为30μm，不超过50μm；小液滴体积小，稳定性更高，耐高温，且液滴总数量更大，适于数字化液滴PCR检测应用。

技术领域

本发明属于生物标志物灵敏检测技术领域，具体涉及一种能产生稳定油包水型小液滴用于数字化PCR灵敏检测的硅油配方。

背景技术

数字化PCR是最为精准的针对核酸定量分析的方法，可精确到具体的分子个数。基于微滴式数字PCR在目前数字PCR中使用最为广泛，具有分析速度快、能耗物耗低、污染小等优点。通过将一个荧光PCR反应体系分配到大量微小的液滴中，每个微滴中包含一个或多个拷贝的目标分子或不包含，实现单分子PCR扩增。由于液滴体积小，单位体积内荧光产物浓度很高，液滴荧光强度高易于检测，灵敏度高。发展核酸分子的超灵敏快速检测技术具有重要意义，特别是针对引发疫情的传染性核酸病毒的快速灵敏检测对疫情的监测与控制意义重大。

用于数字化PCR检测的液滴多为油包水型液滴，也有用琼脂糖凝胶做液滴的报导。PCR反应是高温反应且温度变化剧烈，对液滴的稳定性构成极大的考验，在环境温度骤变的情况下，液滴极不稳定很容易发生融合，而一旦有个别融合发生，体系内的平衡就被打破，大量融合发生，导致实验失败。用于PCR检测的液滴要有极强的稳定性，这也是液滴PCR检测需要面临的问题，甚至有用琼脂糖代替水溶液进行数字化PCR检测的报道。液滴发生的研究发展迅速，发生的方式多种多样，但是PCR反应环境苛刻对液滴稳定性是极大地考验，并非所有液滴发生技术产生的液滴均能进行PCR反应。为提高液滴稳定性开发适合包裹液滴的油是关键，一系列特种油被开发，造价昂贵；或是引入表面活性剂，表面活性剂又会影响生物反应酶的活性，影响实验结果。所以开发出廉价，不含表面活性剂的油是我们的目标。液滴尺寸越小其稳定性越高，越能耐得住高温考验。我们将用商业化量产廉价硅油简单配比后进行小液滴制作，不需要表面活性剂也能稳定的进行数字化PCR反应。

发明内容

发明目的：本发明为液滴制作的有效硅油试剂配方，用作数字化PCR检测小液滴的制作，解决了PCR反应中液滴融合的难题及试剂昂贵的问题，也避免了使用表面活性剂给生物反应带来的负作用。

技术方案：一种能产生稳定油包水型小液滴用于数字化PCR灵敏检测的硅油配方，其特征在于：用于液滴包裹的硅油成分为DOWSIL^TMRSN-0749 Fluid(Dow Corning)和黏度为20mPa.s二甲基硅油；

所述的DOWSIL^TMRSN-0749 Fluid(Dow Corning)和黏度为20mPa.s二甲基硅油体积配比比例为37:50。

进一步的，用于液滴包裹的硅油不添加表面活性剂。

进一步的，硅油混合液密度与水溶液相同。

进一步的，硅油配方适用小液滴制作，小液滴直径尺寸为30μm，不超过50μm。

有益效果：本发明用本试剂配方制作出来的液滴稳定性好，数量多，硅油试剂成分简单，取材方便，降低了成本，适合数字化PCR灵敏检测应用。

附图说明

图1是本发明的PCR反应后的液滴示意图。

具体实施方式