[发明专利]用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途

说明书

本发明公开了一种用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途，该分子标志物为mtDNA D‑loop区的16189位点，其基因型为T/C，当该位点发生转换变异时，其与线粒体单链DNA的结合力下降，会加重或导致胰岛素抵抗，增加妊娠期糖尿病的患病风险，本发明将mt.16189位点的多态型或基因型用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，能准确预测妊娠期糖尿病的患病风险，及时进行人工干预，减少妊娠期糖尿病的发生。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，特别是涉及一种用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途。

背景技术

妊娠期糖尿病对孕产妇、成长中的胎儿和围生儿都构成了严重的威胁，使母体和胎儿发生并发症和合并症的风险大大增加，部分在怀孕之前并没有表现出胰岛素抵抗的妇女随着孕期糖稳态的受压而逐渐发展成妊娠期糖尿病。事实上妊娠期糖尿病与2型糖尿病有共同的病理生理基础，据流行病学研究表明：患有妊娠期糖尿病的妇女将来发展为2型糖尿病的风险更大，目前多数研究认为胰岛素抵抗为妊娠期糖尿病的病理生理基础，贯穿疾病发生和发展的全过程。

在过去几年里，人们致力于研究核基因突变对妊娠期糖尿病的作用，主要包括编码葡萄糖激酶(GCK)、胰岛素、胰岛素受体和葡萄糖载体(GLUT2和GLUT4)的基因突变，但迄今为止，这些基因突变真正的病理基础和在妊娠期糖尿病人群中的突变率在很大程度上还是未知的；近年线粒体基因突变被发现于多种疾病，其中就包括糖尿病，线粒体DNA是除核基因之外可以通过母亲传递给后代的遗传物质，多种可以通过母系遗传的疾病的发病机理中都涉及到线粒体，由于线粒体在能量产生和自由基生成中起到关键作用，所以线粒体基因组可能对多种能量代谢相关疾病的产生和发展起到重要影响。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物及其用途，使用线粒体mt.16189位点的多态型或基因型作为分子标记，预测妊娠期糖尿病的发病风险，做到提早预防和采取措施，减少妊娠期糖尿病对人体的伤害。

本发明所采用的技术方案是，用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，该分子标志物为mtDNA D-loop区的16189位点，mt.16189位点为SNP位点，其基因型为T/C。

进一步的，对mtDNA D-loop区进行PCR扩增时，30μL PCR扩增体系如下：10*Ex Taqbuffer 3μL、dNTP 2μL、PrimerF 1μL、PrimerR 1μL、Ex Taq 0.2μL、DNA 2μL和H₂O 20.8μL；

PCR扩增过程如下：96℃预热5min，然后按96℃30s、60℃30s、72℃45s，循环30次，72℃延长5min，4℃保存。

进一步的，PCR扩增使用的引物如SEQ ID No.1至SEQ ID No.2所示。

进一步的，使用如下任一方法检测mt.16189位点的多态型或基因型：DNA测序、限制性酶切片段长度多态性、单链构象多态性、变性高效液相色谱、SNP芯片或荧光定量PCR技术。

进一步的，使用金标准DNA一代测序法检测PCR扩增体系中mt.16189位点的多态型，测序反应体系如下：DNA 1μL、H₂O 4μL、BigDye 4μL和引物1μL，测序PCR循环条件：96℃1min，然后96℃10s、50℃5s、60℃4min，循环25次。

进一步的，所述测序过程中使用的测序引物如SEQ ID No.3至SEQ ID No.6所示。

用于妊娠期糖尿病患病风险预测的分子标志物，检测分子标志物的物质在制备预测妊娠期糖尿病患病风险的产品中的应用。