[发明专利]一种小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型建立方法

说明书

一种小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立方法，包括以下步骤：（1）称取6mg多肽于7.2mlPBS搅拌均匀后，再加入7.2mlFCA平均分装在两个20ml玻璃注射器内，中间用胶管连接，冰浴上反复推拉2h成油包水的乳液；（2）每只小鼠于蹊部一点，背部三点皮下注射乳液，每个点位注射0.1ml；（3）随后腹腔注射PTX，用量0.5ml/只，于48h再次腹腔注射PTX，用量0.5ml/只，第7天再次注射PTX，用量0.5ml/只。通过建立小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型，可以有效促进临床神经免疫学的研究，通过对EAE发病机制、病情发生发展规律、临床及病理改变、治疗及预防等方面的深入研究，能够为MS的治疗提供充分的实验依据。本发明的方法模型建立效果稳定，临床评分稳定。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体的，涉及一种小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型建立方法。

背景技术

EAE是由针对CNS髓鞘发生免疫攻击的CD4+Th1细胞介导的自身免疫性疾病，抗原致敏的T细胞穿过血脑屏障进入中枢，诱发对自身髓鞘抗原的免疫应答，导致脑及脊髓的免疫损伤。EAE是人类MS的经典动物模型，通过对EAE发病机制、病情发生发展规律、临床及病理改变、治疗及预防等方面的深入研究，能够为MS的治疗提供充分的实验依据。

从鸟类到哺乳类的多种动物如鸡、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、羊、犬、猴等均可成功诱发EAE，但不同种属或同一种属不同品系动物的敏感性有很大差异。诱导方式会导致模型建立的效果不同，现有的模型建立方法其临床评分不稳定，会出现较低评分的模型，影响研究。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供了一种小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立方法，具体技术方案为：

一、实验材料

1、试剂：

（1）髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG35-55多肽）；厂家：SIGMA；规格：1mg；用量：167ug/只。

（2）百日咳（PTX）；厂家：SIGMA；规格：50ug；用量：200ng/只。

（3）完全弗氏佐剂FCA（含MTB：4mg/ml）；厂家：SIGMA；规格：10ml；用量：0.2ml/只（800ug/只MTB）。

2、耗材：20ml玻璃注射器2个、输液胶管、1ml注射器。

3、实验动物：C57BL/6J小鼠，雌性，体重：18-22g。

4、磷酸缓冲盐溶液PBS。

二、实验方法和步骤

1、乳液的准备（36只量）：称取6mg多肽于7.2mlPBS搅拌均匀后，再加入7.2mlFCA平均分装在两个20ml玻璃注射器内，中间用胶管连接，冰浴上反复推拉约2h成油包水的乳液。

2、每只小鼠于蹊部一点，背部三点皮下注射乳液，每个点位注射0.1ml。

3、随后腹腔注射PTX （0.5ml/只），于48h再次腹腔注射PTX（0.5ml/只），第7天再次注射PTX（0.5ml/只）。

4、小鼠一般在12天左右开始出现症状，19天左右行为学表现较明显，模型评分在4-6分。

三、模型的评判

①评分标准：

1分：尾巴无力；

2分：尾巴瘫痪；

2.5分：单侧后肢轻度无力；

3分：单侧后肢显著无力；

4分：单侧后肢瘫痪；