[发明专利]一种鉴别近单双倍体恶性间皮瘤的标志物及其鉴别方法

说明书

一种鉴别近单双倍体恶性间皮瘤的标志物，所述标志物为甲基化酶SETDB1，所述SETDB1通过表达显著抑制了间皮瘤细胞的生长、克隆形成、ROS生成以及体内肿瘤生长，在间皮瘤细胞中发挥肿瘤抑制子的功能，并在近单倍体间皮瘤细胞中表达缺失，却在近双倍体间皮瘤细胞中正常表达，从而鉴别近单双倍体恶性间皮瘤，本发明通过甲基化酶SETDB1来鉴别解决了恶性间皮瘤中近单双倍体特征，从而可以快速的判断肿瘤发展情况。

技术领域

本发明涉及作用于鉴别近单倍体和近双倍体恶性间皮瘤的诊断标志物，属于生物医学分析领域。

背景技术

恶性间皮瘤(malignant mesothelioma，MM)是一种侵袭性胸膜肿瘤，具有高度侵袭性和预后差的特征。空气中的石棉暴露是间皮瘤发生、发展主要的致病因素，职业辐射和既往的胸部辐射治疗也是间皮瘤发展的危险因素。恶性间皮瘤潜伏期时间长，发病高峰期在接触后45年，其总体5年生存率为8.5％，近几十年来其发病率持续上升。

恶性间皮瘤在临床上早期症状不明显，大多数患者在确诊时已是晚期。目前，治疗MM的方法包括手术、放疗和化疗，但均未能显著改善患者生存时间。手术切除包括胸膜切除术/切除纵隔淋巴结/胸膜外肺切除术等，通常适用于上皮样型MM年轻患；放射治疗可以缓解晚期疾病的症状，但难以避开周围正常组织，且对完整肺的毒性很高；对于不能进行手术和放疗的晚期患者，化疗成为他们唯一的选择。

SETDB1是组蛋白甲基转移酶家族的成员之一，人源SETDB1由1291个氨基酸残基组成，全长约143.1kDa，含有22个外显子(Gene ID：9869)，其主要引起组蛋白H3第9位的赖氨酸残基发生甲基化，在基因转录抑制和常染色体基因沉默的生物网络中具有多重调控功能。已有研究表明SETDB1在间皮瘤细胞中存在一定的突变率，但其功能未知。

MM肿瘤细胞根据其染色体数目缺失数，可分为近单倍体核型(Near-haploid)和近双倍体核型(Near-diploid)。在恶性间皮瘤中，近单倍体核型较少(小于5％)，目前仅有一例双相样MM的近单倍体核型被报道，而近双倍体型则较为常见。有研究者认为近单倍体型的产生会导致大量遗传物质损失，可能影响肿瘤进展无关的区域，但这种损失也可能会消除重要肿瘤抑制基因，导致肿瘤发展。

发明内容

本发明的目的在于为鉴别近单倍体和近双倍体恶性间皮瘤寻找新的标志物及其发现该标志物的肿瘤抑制功能。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种鉴别近单双倍体恶性间皮瘤的标志物，其特征在于所述标志物为甲基化酶SETDB1，所述SETDB1通过表达显著抑制了间皮瘤细胞的生长、克隆形成、ROS生成以及体内肿瘤生长，在间皮瘤细胞中发挥肿瘤抑制子的功能，并在近单倍体间皮瘤细胞中表达缺失，却在近双倍体间皮瘤细胞中正常表达，从而鉴别近单双倍体恶性间皮瘤。

一种利用权利要求1所述的鉴别近单双倍体恶性间皮瘤的鉴别方法，该方法包括如下步骤：

a.分别构建携带Lenti-GFP、Lenti-SETDB1、Lenti-SETDB1-GFP基因的慢病毒表达载体，并感染近单倍体间皮瘤细胞株,建立过表达SETDB1模型，western blot；

b.嘌呤霉素筛选30天建立稳转细胞株Lenti-GFP、SETDB1、SETDB1-GFP，通过CTG法检测细胞生长；

c.嘌呤霉素筛选30天建立稳转细胞株Lenti-GFP、SETDB1、SETDB1-GFP，进行克隆形成实验并定量分析；

d.嘌呤霉素筛选30天建立稳转细胞株Lenti-GFP、SETDB1-GFP，检测细胞活性氧ROS水平；

e.稳转细胞株裸鼠成瘤实验；

f.将正常间皮细胞、各组近单倍体和近双倍体间皮瘤细胞裂解，western blot。