[发明专利]新型冠状病毒禽蛋抗体SARS-CoV-2-IgY制剂及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了新型冠状病毒禽蛋抗体SARS‑CoV‑2‑IgY制剂及其制备方法与应用，是将新冠病毒（SARS‑CoV‑2）的S蛋白（刺突蛋白）加不完全佛氏佐剂注射到雌禽的体内，再从禽所生的蛋中提取，纯化得到能与新冠病毒S蛋白结合的禽蛋抗体（SARS‑CoV‑2‑IgY），再将抗体蛋白经膜过滤、除菌、冷冻或喷雾干燥，制成喷雾剂或者口服制剂（口服液，片剂，胶囊等而成），也可加入到牛奶，豆奶等饮品中作为增强免疫的功能性食品。是一种安全、可靠、经济简便、易于推广的生物制剂，是防治新型冠状病毒感染的创新策略。

技术领域

本发明涉及新型冠状病毒（SARS-CoV-2）治疗与预防制剂的开发，特别是新型冠状病毒禽蛋抗体（SARS-CoV-2-IgY）禽蛋抗体制剂及其制备方法与应用。

背景技术

冠状病毒（CoVs）属巢病毒目冠状病毒科正冠状病毒亚科，是一组高度多样化、有包膜的单链正义RNA病毒。根据病毒的血清学和基因组特点该亚科分为α、β、γ、δ四个属。自2002年以来，β冠状病毒(CoV)已经导致了三次人畜共患疾病的爆发，SARS-CoV于2002-2003年，MERS-CoV 于2012年及 SARS-CoV-2 于 2019爆发，2019新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是2019年在人体中发现的冠状病毒新毒株。该病毒已确认存在人传人现象，且潜伏期具有传染性，其主要传播途径为空气传播与接触传播，中间宿主尚不明确。

刺突蛋白 S、包膜 E、膜糖蛋白 M 和核衣壳 N是冠状病毒完成病毒组装和感染必不可少的四种编码结构蛋白。研究发现，S 蛋白位于SARS-CoV-2病毒表面，是病毒的融合蛋白，负责病毒与宿主细胞受体结合，介导 SARS-CoV-2 感染的第一步SARS-CoV-2入侵人体细胞的受体为血管紧张素转换酶2（ACE2）。SARS-CoV-2病毒与ACE2结合后引发炎症反应是COVID-19患者主要的病理过程。发烧、干咳和疲劳是COVID-19发作时的常见症状。大多数患者在胸部CT扫描中出现双侧毛玻璃样阴影改变和淋巴细胞减少。有基础性疾病、年龄大的患者感染后，更容易发生重症和死亡。由于ACE2广泛丰富表达于心血管系统、肠道、肾脏和肺脏中，在病毒感染后机体免疫系统被过度激活，IL-6、TNF-α、TNF-γ等多种细胞因子显著升高，引发细胞因子风暴，导致出现急性呼吸窘迫综合症（ARDS）或伴多器官功能障碍，尽管插管可改善状况，死亡率仍然高达45％。因而免疫系统介导的炎症细胞因子风暴现象，是COVID-19患者发展至重型或危重型的致命因素。

由于SARS-CoV-2病毒传染源尚未明确、并存在多种变种，到目前为止尚无特效的药物治疗方法，作为防治和阻止病毒感染疫情蔓延的主要手段，疫苗的研究在也紧锣密鼓地进行，在近百种SARS-CoV-2候选疫苗中，已有数种疫苗进入临床试验，其最终人群免疫中和抗体的产生与持续的情况还需更广泛的使用证明。在病毒抗体被动免疫治疗方面，有学者发现，利用体外纯化的重组人类ACE2蛋白“中和”SARS-CoV-2病毒，可削减其感染能力1000-5000倍。近日有报道，EUSA Pharma公司IL-6抗体Siltuximab使21例COVID-19患者病情改善和稳定，疾病控制率达76%； Kiniksa公司表示GM-CSFRα抗体Mavrilimumab使 6例患者病情缓解，药物耐受性良好。这些治疗性抗体为抗击SARS-CoV-2感染带来了新的希望。

血浆疗法的技术原理主要是利用康复者血浆中针对病毒的特异性抗体，迅速识别并捕捉病毒，激活体内的补体系统清除病毒。血浆治疗不仅在近年国流行的传染性疾病SARS、MERS、埃博拉和H1N1 流感等重大疫情取得较好的疗效，近期研究数据也显示，将恢复期SARS-CoV-2感染者含有高滴度中和抗体的血浆输注给重症患者，可在短期内恢复器官功能、病毒核酸检测转阴及增加特异性抗体浓度。然而，鉴于恢复期血浆短缺，血浆需求量与供给量差距悬殊，以及供者血浆安全性等因素，获取合格的恢复期血浆仍存在较大困难。