[发明专利]杂交瘤细胞株9C1、PLGF-1单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了杂交瘤细胞株9C1、PLGF‑1单克隆抗体及其制备方法和应用，PLGF‑1单克隆抗体由单克隆抗体杂交瘤细胞株9C1分泌，于2019年9月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2019216。本发明针对PLGF‑1重组蛋白制备出的单克隆抗体对PLGF‑1抗原具有较高的特异性和灵敏度，为胎盘生长因子的功能研究和开发以及相应的诊断试剂的研制奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及杂交瘤细胞株9C1、PLGF-1单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

在子宫螺旋动脉重塑过程中，合体滋养层细胞分泌胎盘生长因子(placentalgrowth factor，PLGF-1)，促进血管生成，改善血流灌注，正常妊娠时，健康孕妇血清在孕5～15周PLGF-1水平低，15-26周PLGF-1表达迅速增加，在妊娠28～30周达高峰，之后胎盘逐渐成熟老化，PLGF-1水平也随之明显下降。胎盘形成缺陷时PLGF-1水平显著降低，导致胎盘发育不良，引起胎盘功能不全，难以给胎儿提供充分的养分和氧气，可能引发一系列的疾病，诸如流产、妊娠期高血压、先兆子痫(preeclampsia，PE)、胎儿生长受限和早产等，情况严重时还会引起相关并发症，诸如死胎、子痫、HELLP综合征和胎盘早剥等，与传统诊断方式相比，PLGF-1浓度值的下降比高血压和蛋白尿的出现要早9～11周，可在疾病发病前五周内浓度有较集中的体现。

目前检测PLGF-1的方法有酶联免疫法、使用微流控的荧光免疫法，然而PLGF-1浓度在血清中含量较低，对相应的检测抗体要求高。因而开发一种快速、灵敏的抗人胎盘生长因子-1抗体及发展一种有望用于临床诊断的抗人胎盘生长因子-1抗体迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是提供杂交瘤细胞株9C1，该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏日期：2019年9月11日，保藏编号为：CCTCC NO：C2019216。

本发明的又一目的是提供一种抗人胎盘生长因子-1的单克隆抗体，它是由保藏编号为：CCTCC NO：C2019216的杂交瘤细胞株9C1分泌，其重链氨基酸序列如序列表中SEQ IDNO.1所示，轻链氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示，该单克隆抗体亚型为IgG1、κ型。

本发明的另一目的是提供上述抗人胎盘生长因子-1的单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：

(1)抗原制备：PLGF-1重组蛋白含有132个氨基酸(GenBank登录号：P49763.2)，利用大肠杆菌表达获得，该蛋白的制备由上海普欣生物技术有限公司完成；

(2)小鼠免疫：选择6周龄的BALB/C小鼠，以PLGF-1重组蛋白为抗原对小鼠进行免疫，每只小鼠以100ug的抗原肽混合佐剂后大腿内侧肌肉注射免疫，第21天后再免疫一次；第3次加强免疫3天后用于融合；

(3)小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的培养：培养小鼠骨髓瘤细胞SP2/0并使其保持良好的生长状态用于杂交瘤细胞融合；

(3)细胞融合：采用聚乙二醇细胞融合法，以BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞作为饲养细胞，在融合前一天，接种BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞于96孔培养板，含20％小牛血清的HAT培养基培养一天，将步骤(2)中备好的小鼠处死，获取脾脏淋巴细胞，收集步骤(3)中的小鼠骨髓瘤细胞SP2/0，将上述两种细胞混合离心，然后以聚乙二醇介导细胞融合，融合后的细胞用细胞培养基稀释，接种至饲养细胞培养板，置37℃5％CO₂培养箱中培养；

(4)杂交瘤细胞的筛选：培养上述培养物，在细胞集落长到大小合适时，吸取细胞培养上清液做抗体鉴定，筛选阳性克隆；