[发明专利]一种压电增强型微流控光电化学传感器的制备方法

权利要求书

1.一种用于败血症标志物降钙素原(PCT)检测的压电增强型纳米阵列微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述微流控生物传感器由微流控底板ITO导电玻璃，微流控芯片，丝网印刷微电极三部分组成，其中，微流控芯片包括电极槽用于安置对电极，参比电极，工作电极，进样口及微通道，出样口及微通道；

其中，所述的微流控底板为氧化铟锡ITO导电玻璃，用于做丝网印刷微电极，键合微流控芯片的底板；

其中，所述的丝网印刷微电极，包括微工作电极和微参比电极；

其中，所述的进样口及微通道包括降钙素原抗体Ab₁进样口及微通道，牛血清蛋白BSA进样口及微通道，降钙素原标准溶液进样口及微通道，降钙素原抗体Ab₂标记物进样口及微通道，含抗坏血酸的PBS溶液进样口及微通道。

2.一种用于败血症标志物检测的压电增强型纳米阵列微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述压电增强型纳米阵列微流控光电化学传感器的制备步骤如下：

（1）用计算机设计软件AUTOCAD设计和绘制微流控的通道图形；

（2）利用设计的图形绘制掩模，并且用标准的软光刻技术加工微流控聚二甲基硅氧烷PDMS芯片；

（3）将5 cm × 4 cm的ITO导电玻璃，依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30 min，氮气吹干，并将洗净的ITO导电玻璃依次进行刻蚀，Ag/AgCI浆料丝网印刷得到微工作电极1和微参比电极2的底板；

（4）将20 µL的0.1 ~ 1.0 mol/L的硝酸锌和0.1 ~ 1.0 mol/L环六亚甲基四胺混合溶液滴在微工作电极上，室温下晾干并在300 ℃下退火10分钟，再将工作电极转移至30 mL含有1.0 mol/L硝酸锌和1.0 mol/L六亚甲基四胺的水溶液中，在95 ℃下水热反应9 h，洗涤干燥后再次将纳米ZnO阵列修饰的工作电极转移至30 mL含有1.0 ~ 15.0 mg/mL的六氯化钨的甲醇溶液中，180 ℃下反应3 h，洗涤干燥并在400 ℃下退火1 h，再继续滴涂6 ~ 10µL、0.5%的壳聚糖溶液，室温下晾干，滴加6 ~ 10 µL、0.5%的戊二醛溶液进行偶联，得到醛基化ZnO/WO₃修饰的微工作电极的底板；

（5）将上述步骤（2）中制备的微流控芯片和步骤（4）中ZnO/WO₃修饰的微工作电极底板一起进行氧气等离子体处理，然后将微流控芯片与底板键合，即完成微流控芯片制备；

（6）通过进样口5用注射泵以20 ~ 40 µL/min注射20 µg/mL的败血症标志物降钙素原抗体Ab₁，到微流控芯片工作电极槽中ZnO/WO₃，4℃冰箱中孵育30 ~ 60 min，并且通过进样口5注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/WO₃/Ab₁；

（7）通过进样口6用注射泵以20 ~ 40 µL/min注射质量分数为0.1 ~ 1.0 %的牛血清蛋白BSA溶液到工作电极槽中ZnO/WO₃/Ab₁，以封闭电极表面上未结合Ab₁的非特异性活性位点，4℃冰箱中晾干，并且从进样口6注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/WO₃/Ab₁/BSA；

（8）通过进样口7用注射泵以20 ~ 40 µL/min注射10 pg/mL ~ 100 ng/mL不同浓度的败血症标志物降钙素原标准溶液到微工作电极ZnO/WO₃/Ab₁/BSA，4℃冰箱中孵育30 ~ 60min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/WO₃/Ab₁/BSA/PCT；

（9）通过进样口8用注射泵以20 ~ 40 µL/min注射20 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL银纳米粒子负载二氧化硅的二抗标记物溶液（Ab₂-Ag@SiO₂）到微工作电极ZnO/WO₃/Ab₁/BSA/PCT，4℃冰箱中孵育30 ~ 60 min，进样口8注射缓冲溶液进行洗涤，得到修饰完全的ZnO/WO₃/Ab₁/BSA/PCT/Ab₂-Ag@SiO₂压电增强型纳米阵列微流控光电化学传感器，即一种用于败血症标志物检测的压电增强型纳米阵列微流控光电化学传感器的制备方法。