[发明专利]一种癌细胞膜嵌合脂质体纳米给药体系的制备方法

说明书

本发明创造提供了一种癌细胞膜嵌合脂质体纳米给药体系的制备方法,避光条件下，将高纯胆固醇、氢化大豆磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000、吲哚美辛溶于无水乙醇中，配制成乙醇溶液；得到的乙醇溶液旋转蒸发后形成薄膜，将薄膜进行水化得水化薄膜；在水化薄膜中加入癌细胞膜悬液，挤压后得嵌合吲哚美辛脂质体；将嵌合吲哚美辛脂质体与ZSTK474无载体纳米粒子混合，挤压后得到癌细胞膜嵌合脂质体纳米给药体系。本发明创造所述的癌细胞膜嵌合脂质体纳米给药体系的制备方法，增加了对肿瘤组织的主动靶向功能，有助于提高药物的抗肿瘤效率，极大的节省肿瘤细胞膜的用量，便于临床应用。

技术领域

本发明创造属于肿瘤靶向治疗、免疫治疗和靶向递送技术领域，尤其是涉及一种癌细胞膜嵌合脂质体纳米给药体系的制备方法。

背景技术

肿瘤是世界上致死率最高的疾病之一，肿瘤的发生与肿瘤细胞内PI3K 信号通路的过度激活密切相关，因而靶向抑制肿瘤细胞的PI3K信号通路可产生抗肿瘤作用。PI3K抑制剂ZSTK474在临床前的动物试验中显示出很好的抗肿瘤效果，但临床试验的效果并不令人满意。这可能与其在肿瘤以外的其他组织分布，产生不良反应导致病人不能耐受而停药、从而使疗效受到影响有关。

非甾体类抗炎药吲哚美辛可抑制前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2) 的合成进而减少PGE2介导的M2型巨噬细胞的形成，从而增加肿瘤微环境中具有抗肿瘤活性的M1型巨噬细胞的比例，增强免疫系统对肿瘤细胞的应答能力，实现对肿瘤组织的免疫治疗作用。但吲哚美辛水溶性及稳定性较差，体内半衰期短，增加药物浓度或给药次数常会造成消化道溃疡、头痛等不良反应。

将分子靶向治疗策略与免疫治疗策略结合，直接杀伤肿瘤细胞的同时增强免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，可提高对肿瘤的治疗效率。但ZSTK474 与吲哚美辛游离药物的组织选择性差，蓄积于正常组织易发生副作用。纳米技术可通过增加药物的比表面积和曲率增加其溶解度和溶出速率，提高生物利用度、控制药物释放，显著降低最大血药浓度及副作用。然而，大多数智能纳米载体通常涉及复杂的制造过程，如材料合成、分离、纯化和修饰，导致批次间的差异化和质量挑战。因此，有必要设计一个简单、可行、稳定、高效的体系。

无载体纳米粒子具备上述特点，且载药量高，无需额外的载体材料，是极具前景的纳米递送系统。但纳米药物进入体内后，可能会被体内免疫系统识别并清除，进而失去其治疗效果。在无载体纳米粒子表面修饰细胞膜，帮助纳米粒子躲避免疫系统的监视，可起到长循环的作用。但癌细胞膜来源有限，限制大规模制备以及应用。

目前，将分子靶向抗肿瘤疗法与免疫疗法联合，直接杀伤肿瘤细胞的同时，改善肿瘤免疫抑制微环境的研究较少，应用无载体纳米粒子并进行细胞膜嵌合负载药物脂质体修饰纳米粒子的递送系统还未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明创造旨在提出一种癌细胞膜嵌合脂质体纳米给药体系的制备方法，通过溶剂交换法制备ZSTK474自组装无载体纳米粒子。利用薄膜分散法制备吲哚美辛脂质体，在水化的薄膜溶液中加入适量癌细胞膜悬液，通过脂质体挤出仪将其修饰于ZSTK474无载体纳米粒子表面构成，增加了对肿瘤组织的主动靶向功能，有助于提高药物的抗肿瘤效率，极大的节省肿瘤细胞膜的用量，便于临床应用。

为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：

一种癌细胞膜嵌合脂质体纳米给药体系的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)避光条件下，将高纯胆固醇、氢化大豆磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、吲哚美辛溶于无水乙醇中，配制成乙醇溶液；

(2)将步骤(1)得到的乙醇溶液旋转蒸发后形成薄膜，将薄膜进行水化得水化薄膜；

(3)在水化薄膜中加入癌细胞膜悬液，挤压后得嵌合吲哚美辛脂质体；