[发明专利]银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物及其抑菌用途

说明书

本发明公开了一种银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物。所述代谢产物为9α‑羟基二氢脱氧卷线孢菌素。9α‑羟基二氢脱氧卷线孢菌素除对青枯菌有抑制作用外，还对常见的典型革兰氏阴性食源性致病菌大肠杆菌、典型的革兰氏阳性食源性致病菌金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有很好的抑制作用，其作用与抗生素硫酸链霉素效果相当，在农业生防和食品防腐方面具有重要的应用。

技术领域

本发明属于真菌代谢物研究技术领域，具体涉及一种银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物及其抑制姜青枯菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的用途。

背景技术

银杏是我国特有的树种，银杏各组织均含有抑菌物质，其提取物具有抗青枯病、黄瓜炭疽病等功能，其提取物中的抗菌成分有很多并非植物体分泌，而是银杏内生真菌次级代谢产物，因此，不同生长环境下生长的银杏，其提取物的抗菌性由于内生真菌种类和数量的差异而呈现差异，导致银杏提取物的药效呈现差异，因此，分离银杏组织的共生真菌，研究其活性分泌物，成了本领域研究的一个热点。

在本发明的前期工作中，发明人筛选到一株银杏内生真菌，具有抗青枯菌的活性，经鉴定为球黑孢菌(Nigrospora sphaerica)，命名为球黑孢菌Gbh45 (Nigrosporasphaerica Gbh45)，于2018年11月05日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国.武汉.武汉大学)，其保藏编号为CCTCC NO:M 2018755。该菌种具有抗青枯菌的活性，但一直未筛选到其活性抗菌物质是什么物质，有待于进一步详细研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物及其抑制及其抑制姜青枯菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的用途。

一种银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物，所述代谢产物为9α-羟基二氢脱氧卷线孢菌素。

所述银杏内生真菌球黑孢菌Gbh45次级代谢产物的制备方法，按照如下步骤进行：

(1)取银杏内生球黒孢菌Gbh45接种到PDA平板上，28℃培养待菌丝生长3～5天，挑取菌丝接种至PDB液体培养基体积中，置恒温振荡培养箱中，28℃条件下发酵培养5～7d，待发酵液呈红色时终止培养，收集发酵液，4000-6000 g离心8-12min，收集上清；

(2)将收集的上清液用萃取剂进行萃取，收集浓缩，制成。

所述萃取剂为乙酸乙酯或二氯甲烷。

所述银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物在抑制青枯菌中的应用。

所述银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物在抑制大肠杆菌中的应用。

所述银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物在抑制金黄色葡萄球菌中的应用。

所述银杏内生真菌球黑孢菌次级代谢产物在抑制枯草芽孢杆菌中的应用。

本发明的有益效果：本发明银杏内生真菌发酵液中的次级代谢产物9α-羟基二氢脱氧卷线孢菌素除对青枯菌有抑制作用外，还对常见的典型革兰氏阴性食源性致病菌大肠杆菌和典型的革兰氏阳性食源性致病菌金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌具有很好的抑制作用，其作用与抗生素硫酸链霉素效果相当。因此，9α-羟基二氢脱氧卷线孢菌素对细菌具有广谱的抑菌效果，在农业生防和食品防腐方面具有重要的应用。

附图说明

图1为二氯甲烷和乙酸乙酯萃取液薄层层析图；

图中，A：二氯甲烷萃取浸膏；B：乙酸乙酯萃取浸膏。

图2为二氯甲烷萃取浸膏柱层析分离活性成分HPLC谱图。

图3为乙酸乙酯萃取浸膏柱层析分离活性成分HPLC谱图。

图4为银杏内生真菌球黑孢菌Gbh45发酵液的乙酸乙酯萃取液硅胶柱层析。