[发明专利]一种通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法

权利要求书

1.一种通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其步骤包括，

（1）摘取7-8月份未成熟的白木通果实，经处理，从果肉中取出未成熟的种子；

（2）将未成熟种子沿背腹线纵切成半，将种子切面朝上放置于MS固体培养基中进行诱导体细胞胚胎发生，获得诱导体细胞胚；

（3）将诱导出的体细胞胚转移至MS固体培养基中进行继代增殖培养，获得增殖体细胞胚；

（4）将增殖体细胞胚转移至成苗培养基中诱导成苗；

（5）将获得的幼苗进行炼苗，炼苗后进行移栽，进而获得白木通再生苗。

2.如权利要求1所述通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述处理包括果实处理和种子处理。

3.如权利要求2所述通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其特征在于，所述果实处理包括采集表面无病斑未成熟的白木通果实，用毛刷将果实表面污渍刷净并将其放入洗洁精溶液中浸泡 20min，然后用蒸馏水冲洗 3-5 次，再用滤纸将果实表面水分吸干，之后将表面清洗后的果实放入超净工作台，取出果实中未成熟的种子。

4.如权利要求2所述通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其特征在于，所述种子处理包括将取出的种子用无菌水冲洗3-5次，随后用75%的酒精浸泡30s，再用无菌水冲洗2-3次，接着用0.1 w/v %HgCl₂溶液浸泡7min，再用无菌水冲洗3次，最后将种子用无菌滤纸将表面水分吸干后备用。

5.如权利要求1所述通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述诱导具体为在MS培养基中添加7.0g/L的琼脂和30.0g/L的蔗糖，控制pH值5.8-6.0，以每个培养基放置6粒种子为一组，诱导时间40天，诱导温度25±2℃，光照时间12h，光照强度为1500lx，诱导体细胞胚胎发生，获得诱导体细胞胚，每组重复10次。

6.如权利要求1所述通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述继代增殖培养包括将起始产生的处于子叶期的体细胞胚从合子胚上分离出来，放置于MS培养基中进行继代培养至少三轮，每轮产生的体细胞胚用于下一轮的体细胞胚继代培养，MS培养基中添加7.0g/L的琼脂和30.0g/L的蔗糖，控制pH值5.8-6.0。

7.如权利要求1所述通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述成苗培养基为1/2 MS+0.5mg/L 6-BA +7.0g/L 琼脂+30.0 g/L蔗糖，pH值为5.8-6.0。

8.如权利要求1所述通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其特征在于，步骤（5）中，所述炼苗为将子叶和根系发育良好的幼苗转移至穴盘中，在温室大棚放置2个月进行炼苗，温度在30±3度，湿度在75±5%。

9.如权利要求8所述通过体细胞胚胎发生途径快速繁殖白木通幼苗的方法，其特征在于，所述穴盘的组成为重量比河沙：有机肥=3:1的混合物。