[发明专利]一种鸡胚细胞狂犬病病毒的生物反应器工艺有效
| 申请号： | 202011256730.X | 申请日： | 2020-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN112342185B | 公开（公告）日： | 2022-12-02 |
| 发明（设计）人： | 罗姗;李慧;王春华;周维;陈楚如;吴灼斌;洪玮琪;黄致翔;曹静;梁琳琳;郭采平;黄伟荣;李云富;刘永娣;刘璐;谭梦思;刘爱和;李彬;梁富;徐尔赞;刘依润 | 申请（专利权）人： | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N5/02;C12N7/00;C12N7/02 |
| 代理公司： | 东莞市中正知识产权事务所(普通合伙) 44231 | 代理人： | 徐康 |
| 地址： | 518107 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 狂犬病 病毒 生物反应器 工艺 | ||
1.一种鸡胚细胞狂犬病病毒的生物反应器工艺，其特征在于：包括以下步骤：
(1)制备原代鸡胚细胞：取9～11日龄的SPF鸡胚，经剪切、胰蛋白酶消化，离心去除消化液，细胞沉淀用无血清培养基重悬后，制备成单个鸡胚细胞悬液；所用的胰蛋白酶浓度为0.25％；
(2)细胞接种至生物反应器：在具有固定床篮式搅拌系统的生物反应器中，以片状载体为载体，以无血清培养基为培养基质，接种步骤(1)制备好的原代鸡胚细胞悬液，接种密度2.3～3.0*106个/mL；所述的无血清培养基中还添加有0.5％人血白蛋白和100ng/ml的葡聚糖硫酸钠；片状载体的使用量为20g/L；
(3)接种狂犬病病毒CTNCEC25株：原代鸡胚细胞接种至生物反应器4～6h，以MOI＝0.01FFU/细胞的感染量，将工作种子批毒种接种至生物反应器内，与原代鸡胚细胞混合均匀，使病毒感染细胞；
(4)调节生物反应器控制参数：温度35℃，pH值7.6，搅拌速率70～90rpm，溶氧70％，培养、收获病毒液；
(5)按批次收获病毒液：病毒接种后培养至葡萄糖含量＜3.0g/L、病毒滴度≥7.0lgFFU/mL和抗原含量≥2.0IU/mL，收获病毒上清液；采用全体积收获或者半体积收获3～5次，收液体积≥2个。
2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：所述步骤(2)的采用的片状载体为美国NBS公司的片状载体。
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