[发明专利]GmPIN1基因突变调控大豆结瘤和密植的方法及其应用

权利要求书

1.GmPIN1基因突变调控大豆结瘤和密植的方法，其特征在于，使大豆植株GmPIN1中的三个同源基因GmPIN1a，GmPIN1b，GmPIN1c发生突变，获得大豆三突变体Gmpin1abc；具体为：

GmPIN1a基因核酸序列如SEQ ID No.1所示，使GmPIN1a第2513-2541个核苷酸间的核苷酸序列发生缺失；GmPIN1b基因核酸序列如SEQ ID No.2所示，使GmPIN1b第2589-2617个核苷酸间的核苷酸序列发生缺失；GmPIN1c基因核酸序列如SEQ ID No.3所示，使GmPIN1c第3254-3282个核苷酸间的核苷酸序列发生缺失。

2.根据权利要求1所述的GmPIN1基因变异调控大豆结瘤和密植的方法，其特征在于，采用基因敲除方式使GmPIN1中的三个同源基因GmPIN1a，GmPIN1b，GmPIN1c同时出现碱基缺失，使蛋白提前终止。

3.根据权利要求2所述的GmPIN1基因变异调控大豆结瘤和密植的方法，其特征在于，大豆三突变体Gmpin1abc通过下列方法获得：

S1：设计构建同时靶向GmPIN1a，GmPIN1b，GmPIN1c三个基因的sgRNA；

S2：利用退火反应获得双链寡核苷酸；

S3：利用BsaI核酸内切酶线性化pEF1A2载体； S4：利用T4连接酶将S2和S3所获得的产物连接在一起； S5：将S4所获得的质粒载体导入到GV3101农杆菌中； S6：利用S5所获得的农杆菌用于侵染大豆； S7：将步骤S6所获得的产物进行植物组织培养；

S8：对S7所获得的组培苗进行植物抗性筛选，从而获得不含CRISPR/Cas9载体片段的稳定的转基因大豆。

4.如权利要求1-3任意一项GmPIN1基因突变调控大豆结瘤和密植的方法的应用，其特征在于，应用于大豆及其相关株型中结瘤数目侧枝夹角的调节。