[发明专利]一种活细胞内检测CLK3激酶活性的生物探针及其应用有效
| 申请号： | 202011261815.7 | 申请日： | 2020-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN112444509B | 公开（公告）日： | 2022-04-19 |
| 发明（设计）人： | 刘丹;曹旭;陈丰 | 申请（专利权）人： | 中国科学技术大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 张莹 |
| 地址： | 230026 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞内 检测 clk3 激酶 活性 生物 探针 及其 应用 | ||
1.一种活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针，其特征在于，所述生物探针包括一对能发生荧光共振能量转移的荧光供体mTFP和荧光受体EYFP、能识别磷酸化标记的FHA2结构域、氨基酸序列为GGSGG的柔软构象的连接子以及能被CLK3激酶磷酸化的多肽底物片段，所述能被CLK3激酶磷酸化的多肽底物片段的氨基酸序列为RSRSRSWTRSRSRSR。
2.根据权利要求1所述的活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针，其特征在于，所述生物探针的DNA序列为SEQ ID NO:1。
3.根据权利要求1所述的活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针，其特征在于，所述生物探针的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。
4.根据权利要求1所述的活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针，其特征在于，所述生物探针的5’端包括核输入序列NLS。
5.根据权利要求1所述的活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针，其特征在于，所述生物探针的5’端包括SRSF2蛋白全长序列。
6.一种表达载体，其包含根据前述权利要求1-5中任一项所述的活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针。
7.一种细胞，其包含根据权利要求6所述的表达载体。
8.根据权利要求7所述的细胞，其特征在于，所述细胞选自由HeLa细胞、293T细胞、U2OS细胞、A549细胞、MDA-MB-231细胞、MCF7细胞组成的组中。
9.根据前述权利要求1-5中任一项所述的活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针在CLK3抑制剂分子的筛选中的用途，所述用途是非治疗和/或诊断目的的。
10.根据前述权利要求1-5中任一项所述的活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针在活细胞内检测CLK3激酶活性中的用途，所述用途是非治疗和/或诊断目的的。
11.根据前述权利要求1-5中任一项所述的活细胞内检测CLK3激酶活性的FRET生物探针在活细胞内检测CLK3激酶活性的试剂或试剂盒的制备中的用途，所述用途是非治疗和/或诊断目的的。
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