[发明专利]过氧麦角甾醇体外培养NK细胞提高其杀伤力的用途

说明书

本发明公开了过氧麦角甾醇体外培养NK细胞提高其杀伤力的用途。本发明发现，过氧麦角甾醇孵育可以有效提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，且该杀伤力随着过氧麦角甾醇孵育浓度的提高而增强。因此，可以将过氧麦角甾醇用于NK细胞体外培养，获得杀伤力更强的NK细胞，为过继性NK细胞治疗创造更好的疗效。

技术领域

本发明属于细胞治疗领域，涉及过继性NK细胞治疗，具体涉及过氧麦角甾醇体外培养NK细胞提高其杀伤力的用途。

背景技术

NK细胞占外周血淋巴细胞总数的5％～15％，由造血干细胞发育而来，经历最早前体NK细胞到前体NK细胞，逐渐发育为未成熟NK细胞，然后在物理接触和骨髓基质中细胞因子环境诱导下，逐步发育为功能完整的成熟NK细胞，最后获得细胞溶解潜力。

如何获得足够数量以及高质量的NK细胞用于临床，是NK细胞过继免疫治疗应用于临床所面临的挑战之一。NK细胞的发育和功能成熟受到多种细胞因子的调控。这些细胞因子单独或组合在促进NK细胞的分化成熟、活化、增殖及细胞毒活性过程中发挥重要的作用。借助细胞因子刺激，可进一步扩增NK细胞数量及增强NK细胞功能，有助于为过继性NK细胞治疗创造更好的疗效。

但是，单纯细胞因子的刺激效果有限。越来越多的研究发现，很多小分子化合物或者多糖、多肽等大分子化合物都可以刺激NK细胞提高其增殖活性或/和杀伤力。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供过氧麦角甾醇体外培养NK细胞提高其杀伤力的用途，进而可以用于制备能提高NK细胞杀伤力的NK细胞培养基。

本发明目的通过下面的技术方案实现：

过氧麦角甾醇体外培养NK细胞提高其对肿瘤细胞杀伤力的用途。以0、5、10μM过氧麦角甾醇孵育的NK细胞对肝癌HepG2细胞具有不同的杀伤力，与0μM过氧麦角甾醇孵育的NK细胞(即不用过氧麦角甾醇孵育的常规NK细胞)相比，5、10μM过氧麦角甾醇孵育的NK细胞具有更强的杀伤力，且该杀伤力随着过氧麦角甾醇孵育浓度的提高而增强。

在一个具体实施例中，所述肿瘤为肝癌。

过氧麦角甾醇用于制备体外培养NK细胞提高其对肿瘤细胞杀伤力的培养基的用途。

有益效果：

本发明发现，过氧麦角甾醇孵育可以有效提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，且该杀伤力随着过氧麦角甾醇孵育浓度的提高而增强。因此，可以将过氧麦角甾醇用于NK细胞体外培养，获得杀伤力更强的NK细胞，为过继性NK细胞治疗创造更好的疗效。过氧麦角甾醇可以制备成体外培养NK细胞提高其对肿瘤细胞杀伤力的培养基。

附图说明

图1为0d和14d CD56⁺CD3^-细胞占总细胞比率；

图2为不同处理NK细胞对肝癌HepG2细胞的杀伤力。

具体实施方式

以下实施例是为了具体本发明的实质性技术内容，不能以下实施例记载的具体常规细节限定本发明的保护范围。

一、实验材料

人源NK细胞完全培养基的品牌为Procell，购自武汉普诺赛生命科技有限公司。

HepG2细胞购自ATCC，用含10％FBS的RPMI 1640培养基于37℃、5％CO₂恒温条件下培养，每2～3d传代。取对数生长期细胞用于试验。

过氧麦角甾醇(CAS登录号2061-64-5)购自上海源叶生物科技有限公司，纯度(HPLC-ELSD)96.0％。

FBS和RPMI 1640培养基的品牌为Gibco，购自江苏齐氏生物科技有限公司。