[发明专利]一种乌拉草总黄酮纯化方法及其用途

说明书

本发明公开了一种乌拉草总黄酮纯化方法、化学成分分析及抗氧化活性研究。本发明原材料是乌拉草，采用层次分析法结合响应面法确定纯化乌拉草黄酮的最优条件。并对纯化后乌拉草黄酮的化学成分进行鉴定。主要采用高效液相色谱‑质谱联用技术对纯化后的乌拉草黄酮进行化学成分分析。最后采用液相混标法合紫外光谱一致性比较进一步解析乌拉草化学成分。之后对纯化后黄酮进行抗氧化活性研究。确定的最佳纯化条件，工艺有效简便。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，更具体的涉及一种乌拉草总黄酮纯化方法及其用途。

背景技术

乌拉草(Carex meyeriana Kunth)主要生长在黑龙江、吉林、内蒙古等地，与人参、貂皮并称为“东北三宝”，是多年生草本植物，生命力顽强，全年均可使用。乌拉草具有保暖、透气、抑菌等独特功能，且应用历史悠久，药用价值高、具有终身不寄生真菌的特点，因此具有较强的抑菌作用。乌拉草中主要含有黄酮类和脂肪酸类化合物，具有滋养皮肤、改善睡眠、调节血脂等特点。乌拉草资源富足，应用广泛，用途颇多，但目前对乌拉草的主要有效成分黄酮类化学成分的研究较少，而黄酮是乌拉草中的主要活性成分之一，具有抗氧化、抗病毒、抑菌等重要的作用，具有较高的生物活性和研究价值。

黄酮化合物是一种天然存在的抗氧化物，在植物界中分布广，种类多，传统的黄酮类化合物为酚酸类，普遍具有抗氧化和抑菌活性，在生物学上具有重要的意义，尤其是在医药学领域研究比较广泛，它的化学成分和生物活性的研究已成为热点。但由于黄酮化合物具有不稳定，易水解、氧化等性质，因此有必要了解其结构特点及构效关系，才能更全面、深入地了解黄酮化合物的生物活性。为进一步将此类化合物得到广泛开发和较好的应用，可以利用多种解析方法进行化学成分分析及鉴定结构，多种方法相互弥补，解析更为准确，利于探讨构效关系。

传统正交试验方法分析离散型数据，预测性不是很好。后来，人们开始使用响应面分析方法，但作为评价指标的响应值较为单一且评价标准不一致，进而，影响纯化效果。因此，需要将层次分析法(AHP) 与响应面法(RSM)相结合，进行纯化条件评估，采用单因素实验确定纯化变量的适宜范围，完成权重系数的分配，得出最佳工艺的综合评分，科学的解决了多指标纯化评价问题。

液质联用技术是一种以液相色谱为主要分离手段，质谱法作为检测手段的色谱检测技术集合了液相色谱仪的高分离能力和质谱仪的高灵敏度、高专属性的特点，简化了复杂混合物的分离纯化过程灵敏度高、专属性强、重现性好，能提供丰富的结构信息，可根据一级、二级甚至多级质谱信息确定化合物的分子量并推断出可能分子结构，为药物杂质的结构鉴定提供快速、准确的方法。是目前结构鉴定分析领域应用最为广泛的一种技术。近二十年来，随着液质联用技术发展的日臻完善，其在药物杂质结构鉴定研究中的应用也越来越广泛，展现出广阔的应用前景。

发明内容

本实验目的是对乌拉草总黄酮提取液进行纯化。本发明成果将为今后对该乌拉草总黄酮纯化工艺及纯化后化学成分分析和抗氧化活性研究提供一定的科学依据。乌拉草黄酮类化学成分研究在乌拉草保健食品开发和有效成分提取具有一定的研究价值。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

纯化后乌拉草黄酮的化学成分分析和抗氧化活性研究该方法包括以下的步骤：

(1)静态吸附/解吸附

通过摇床先进行吸附，抽滤，然后进行解吸附，测量吸附率、解吸附率与回收率。初步筛选X-5、S-8、聚酰胺、AB-8、D101、NKA-∥6 中树脂。

(2)动态吸附/解吸附

取适量树脂装入层析柱中，上样、水洗、醇洗，测量回收率。进一步筛选最佳的树脂。

(3)单因素实验