[发明专利]一种生物因子睫毛滋养液及其制备方法

权利要求书

1.一种生物因子睫毛滋养液，包括，黄芪提取物、干姜浸膏、维生素E、甘油、氮酮、丙二醇、氢氧化钠、乳酸；

所述黄芪提取物，提取自外植体毛状根中，外植体为根、茎、叶；

所述外植体毛状根，用发根农杆菌对黄芪外植体进行侵染：取茎段为外植体，培养基pH值为5-6，蔗糖浓度为2-5%，外植体龄为30-35D，超声波处理时间4s，预培养和共培养2-3D，侵染时间为5-10min，加入外源激素0.1mg/mLNAA；

所述发根农杆菌为A4、15834、1025和1000菌株中的一种；

所述发根农杆菌其Ri质粒含有FGF-10基因，通过PCR扩增FGF10基因，经双酶切后，连接到Ri质粒。

2.根据权利要求1所述的一种生物因子睫毛滋养液，其特征在于：按照质量比黄芪提取物3-5份、干姜浸膏1-3份、维生素E 0.5-2份、甘油2-8份、氮酮0.8-3.5份、丙二醇0.4-3份、氢氧化钠0.1-0.6份、乳酸0.5-4份。

3.根据权利要求2所述的一种生物因子睫毛滋养液，其特征在于：按照质量比黄芪提取物5份、干姜浸膏1.5份、维生素E 0.5份、甘油6份、氮酮1.2份、丙二醇1.5份、氢氧化钠0.3份、乳酸1.6份。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的一种生物因子睫毛滋养液的制备方法，包括以下具体步骤：

步骤一：黄芪提取物的制备：取黄芪毛状根洗净，放入研钵中液氮研磨，加入去离子水搅拌均匀后静止3-5h，8000-12000rpm离心20-40min，取上清液得黄芪提取物；

步骤二：干姜浸膏的制备：取干姜粉，用90%乙醇作溶剂，浸渍24h后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液850ml，另器保存，继续渗漉至漉液近无色、姜的香气和辣味已淡薄为止，收集渗漉液，在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，混匀，滤过，静置，待澄清，滤过，即得姜流浸膏；

步骤三：将10%甘油碾匀，加入纯化水适量，待充分溶胀后，加入黄芪提取物、干姜浸膏、丙二醇、氮酮、维生素E、乳酸，搅拌均匀，用氢氧化钠调节pH为5.5-6.5。

5.根据权利要求4所述的一种生物因子睫毛滋养液的制备方法，其特征在于：所述黄芪毛状根进行PCR检测：根据设计的一对FGF-10基因引物，在条带627bp出现了与基因引物相同的条带，而未转化的黄芪外植体则没有扩增出条带，证明农杆菌Ri质粒己经整合进毛状根的基因组中。

6.根据权利要求5所述的一种生物因子睫毛滋养液的制备方法，其特征在于：所述黄芪毛状根转接到液体培养基中扩大增殖培养：用MS液体培养基，蔗糖浓度为30g/L，添加30µmol/L的JA，培养25-35D。