[发明专利]一种双导电铝箔胶带的应用

说明书

本发明提供一种双导电铝箔胶带的应用，具体是一种双导电铝箔胶带在丝状真菌扫描电镜样品制备中的应用。其中，丝状真菌扫描电镜样品的制备方法，包括以下步骤：1.固体培养基制备；2.双导电铝箔胶带的制备；3.接种和插片；4.双导电铝箔胶带爬片上样品台；5.扫描电镜的观察。采用双导电铝箔胶带，具有优良的导电性，双导电铝箔胶带的一面具有胶性物质，在胶性面生长的米曲霉菌丝可牢固地附着在上面，菌丝体与双导电铝箔胶带紧紧贴合，载体片上的菌丝、孢子囊和孢子的位置和形状不会发生改变，具有更好的电镜扫描原位观察效果。

技术领域

本发明涉及丝状真菌的扫描电镜检测技术领域，具体是涉及一种双导电铝箔胶带的应用，尤其是一种双导电铝箔胶带在扫描电镜样品制备中的应用。

背景技术

原位观察菌丝、孢子囊和孢子是进行丝状真菌菌丝形态、孢子囊形态发育和孢子形态的重要手段。传统的玻璃盖玻片爬片法虽然能够在光镜下观察孢子和菌丝形状，但是在扫描电镜观察时由于玻璃片不导电，且其面积较大，往往导致放电而影响电镜观察结果质量，因此一般会将爬有真菌菌丝的玻璃盖玻片进行破碎，减弱材料放电现象，增加材料的导电性。但是这种操作容易破坏了菌丝原有的形态，也会导致菌丝体的断裂和孢子囊的破裂，从而导致观察质量不好。专利“CN 104928343 A”公开了用铝箔作为载体进行样品制备的方法，该法存在的问题主要有：普通的具有导电性的金属箔片因表面光滑，在菌丝生长阶段，若真菌菌丝过短，很难爬到铝箔上，从而铝箔上菌丝量少，不利于观察；在取样过程，需要移动铝箔，菌丝体容易从光滑的箔片上脱离或滑落，导致电镜扫面时有明显的痕迹，影响观察结果。因此，采用一种无需分离破坏菌丝体且有利于菌丝体爬片的载体，可有效解决上述问题。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种双导电铝箔胶带的应用，具体为双导电铝箔胶带在扫描电镜样品制备中的应用。首次利用双导电铝箔胶带作为菌丝爬片载体，该载体薄片具有优良的导电性，双导电铝箔胶带的一面具有胶性物质，在胶性面生长的米曲霉菌丝可牢固地附着在上面，菌丝体与双导电铝箔胶带紧紧贴合，载体片上的菌丝、孢子囊和孢子的位置和形状不会发生改变，具有更好的电镜扫描原位观察效果。

为了实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种双导电铝箔胶带在扫描电镜样品制备中的应用。

优选地，一种双导电铝箔胶带在丝状真菌扫描电镜样品制备中的应用。

优选地，一种双导电铝箔胶带在米曲霉扫描电镜样品制备中的应用。

其中，所述丝状真菌扫描电镜样品的制备方法，包括以下步骤：

(1)固体培养基的制备：

100mL DPY培养基：2g葡萄糖，1g蛋白胨，0.5g酵母提取物，0.5g KH₂PO₄,0.05gMgSO₄，pH调至6.5-7.0，加入1.6g琼脂粉；121℃灭菌15min，然后倒入直径9cm的玻璃培养皿中，培养基的厚度1-2mm；

(2)双导电铝箔胶带的制备：

取15mm宽度双导电铝箔胶带，截取15mm长度，面积为15mm×15mm；121℃下，灭菌20min；灭菌后，在超净无菌工作台中，用灭菌过的镊子从双导电铝箔胶带的其中一个角开始，小心分离双导电铝箔胶带与离型纸，备用；

(3)接种和插片：

在超净无菌工作台中，用移液枪取5μL菌液点到DPY培养基的中心；然后用灭过菌的镊子将去掉离型纸的双导电铝箔胶带，轻轻地斜插入到距离菌液点1cm处的培养基中，双导电铝箔胶带胶性面靠近生长的米曲霉菌落，作为菌丝体爬坡面；30℃的培养箱中黑暗培养72～96h，当培养基上的双导电铝箔胶带的2/3被米曲霉菌丝覆盖时，停止培养；

(4)双导电铝箔胶带爬片上样品台：