[发明专利]一种精子梯度分离液及其制备方法有效
| 申请号： | 202011272697.X | 申请日： | 2020-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN112391339B | 公开（公告）日： | 2022-05-17 |
| 发明（设计）人： | 林小贞 | 申请（专利权）人： | 深圳韦拓生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076 |
| 代理公司： | 深圳市德锦知识产权代理有限公司 44352 | 代理人： | 黄萍 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市坪山区坪*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 精子 梯度 分离 及其 制备 方法 | ||
1.一种精子梯度分离液，包括上层精子梯度液和下层精子梯度液，其特征在于，所述精子梯度分离液配方为含缓冲成分的无机盐溶液、分离剂和抗氧化物，所述抗氧化物为乙酰半胱氨酸，所述分离剂为亲水性硅烷以共价键结合包裹的二氧化硅颗粒水溶液，所述亲水性硅烷以共价键结合包裹的二氧化硅颗粒水溶液是亲水性硅烷以共价键结合包裹的二氧化硅颗粒以10-30％(w/w)的比例加入超纯水中，充分搅拌混匀形成的混悬液；
所述上层精子梯度液为氯化钠110mM/L、氯化钾4.69mM/L、磷酸二氢钾0.35mM/L、二水氯化钙2.04mM/L、七水硫酸镁0.2mM/L、碳酸氢钠4mM/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸12mM/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠9mM/L、丙酮酸钠0.33mM/L、乳酸钠10.7mM/L、葡萄糖2.78mM/L、丙胺酰谷氨酰胺0.5mM/L、乙二胺四乙酸二钠0.01mM/L、牛磺酸0.1mM/L、硫酸庆大霉素0.01g/L、乙酰半胱氨酸0.1mM/L和40％(v/v)的所述分离剂；
所述下层精子梯度液为氯化钠110mM/L、氯化钾4.69mM/L、磷酸二氢钾0.35mM/L、二水氯化钙2.04mM/L、七水硫酸镁0.2mM/L、碳酸氢钠4mM/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸12mM/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠9mM/L、丙酮酸钠0.33mM/L、乳酸钠10.7mM/L、葡萄糖2.78mM/L、丙胺酰谷氨酰胺0.5mM/L、乙二胺四乙酸二钠0.01mM/L、牛磺酸0.1mM/L、硫酸庆大霉素0.01g/L、乙酰半胱氨酸0.1mM/L和80％(v/v)的所述分离剂。
2.一种精子梯度分离液，包括上层精子梯度液和下层精子梯度液，其特征在于，所述精子梯度分离液配方为含缓冲成分的无机盐溶液、分离剂和抗氧化物，所述抗氧化物为乙酰半胱氨酸，所述分离剂为亲水性硅烷以共价键结合包裹的二氧化硅颗粒水溶液，所述亲水性硅烷以共价键结合包裹的二氧化硅颗粒水溶液是亲水性硅烷以共价键结合包裹的二氧化硅颗粒以10-30％(w/w)的比例加入超纯水中，充分搅拌混匀形成的混悬液；
所述上层精子梯度液为氯化钠115mM/L、氯化钾4.99mM/L、磷酸二氢钾0.4mM/L、二水氯化钙2.21mM/L、七水硫酸镁0.25mM/L、碳酸氢钠5.5mM/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸13.5mM/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠7mM/L、丙酮酸钠0.45mM/L、乳酸钠13.55mM/L、葡萄糖3.92mM/L、丙胺酰谷氨酰胺0.75mM/L、乙二胺四乙酸二钠0.01mM/L、牛磺酸0.15mM/L、硫酸庆大霉素0.01g/L、乙酰半胱氨酸0.13mM/L和45％(v/v)的所述分离剂；
所述下层精子梯度液为氯化钠115mM/L、氯化钾4.99mM/L、磷酸二氢钾0.4mM/L、二水氯化钙2.21mM/L、七水硫酸镁0.25mM/L、碳酸氢钠5.5mM/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸13.5mM/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠7mM/L、丙酮酸钠0.45mM/L、乳酸钠13.55mM/L、葡萄糖3.92mM/L、丙胺酰谷氨酰胺0.75mM/L、乙二胺四乙酸二钠0.01mM/L、牛磺酸0.15mM/L、硫酸庆大霉素0.01g/L、乙酰半胱氨酸0.13mM/L和90％(v/v)的所述分离剂。
3.如权利要求1或2所述的精子梯度分离液在人类精子体外制备过程中的应用。
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