[发明专利]肺癌细胞辐射适应性MicroRNA表达谱检测方法

权利要求书

1.一种肺癌细胞辐射适应性MicroRNA表达谱检测方法，其特征在于，包括：

步骤100.标本选择

将目标肺癌细胞分为实验组和对照组；

其中，实验组：依次采用低剂量、高剂量的射线辐照目标肺癌细胞至细胞消化；

对照组：采用高剂量的射线辐照目标肺癌细胞至细胞消化；

将上述细胞消化后的实验组和对照组进行低温保存；

步骤200.总RNA提取

加入RNA提取试剂至实验组和对照组中的目标肺癌细胞系中，使目标肺癌细胞裂解，对细胞裂解液进行处理后得到水溶解沉淀物；

步骤300.miRNA芯片处理

分别取一定量的实验组和对照组的总RNA，进行芯片杂交，杂交后的芯片进行图像扫描及数据处理，得出不同剂量辐照后的肺癌细胞MicroRNA表达谱的差异数据。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤100中，将目标肺癌细胞分为实验组和对照组之前，包括：

选择目标肺癌细胞系，采用10％FBS，1％青链霉素的培养基，37℃，5％CO₂的培养条件下培养至少48小时，使目标肺癌细胞至对数生长期。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤100包括：

对于实验组的目标肺癌细胞：

采用X射线分别按照50mGy、200mGy的辐照剂量照射目标肺癌细胞；

停止照射并至少间隔4小时后，采用20Gy的辐照剂量再次照射目标肺癌细胞至细胞消化后低温保存；

对于对照组的目标肺癌细胞：

采用20Gy的辐照剂量照射目标肺癌细胞至细胞消化后低温保存。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤200包括如下操作步骤：

步骤201：在实验组和对照组中的目标肺癌细胞中，分别加入RNA提取试剂，使目标肺癌细胞裂解，分别收集相对应的细胞裂解液至实验组和对照组的离心管中；

步骤202：在离心管中分别加入氯仿，振荡，离心；

步骤203：吸取上清，加入异丙醇并混匀；

步骤204：将离心管置于冰箱冷藏；

步骤205：取出离心管离心，弃去上清，在管底形成有白色沉淀，加入75％乙醇并振荡，离心；

步骤206：弃去上清，室温下晾干后，加入经DEPC处理的水溶解沉淀。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤300包括：

步骤301：以辐照条件为50mGy-20Gy、200mGy-20Gy的目标肺癌细胞为实验组，以辐照条件20Gy的目标肺癌细胞为对照组，分别取一定量的总RNA，采用微流体芯片进行芯片杂交，杂交后的芯片用微阵列基因芯片扫描仪进行图像扫描，采用生物芯片扫描分析软件进行数据分析，计算两种荧光信号的比值，用t-test进行差异显著性分析，p0.05为有显著性差异；

其中，采用聚类分析方法分析不同剂量辐照后肺癌细胞MicroRNA表达谱的差异；

步骤302：筛选出辐照条件为50mGy-20Gy和200mGy-20Gy的实验组与辐照条件为20Gy的对照组相比较，得出表达有共同显著差异趋势的microRNA的差异数据。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，还包括：

步骤400.采用qRT-PCR实验方法对表达有共同显著差异趋势的microRNA进行验证。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤400还包括：检测经步骤100处理后的实验组和对照组中，目标肺癌细胞的DNA损伤情况。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤400还包括：检测经步骤100处理后的实验组和对照组中，目标肺癌细胞的凋亡情况。

9.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，在步骤300之前，还包括：

步骤220.总RNA样本质量检测：

步骤221：琼脂糖凝胶电泳分别分析实验组和对照组的RNA降解程度以及污染程度；

步骤222：采用超微量分光光度计分别检测实验组和对照组的RNA的纯度；

步骤223：采用荧光计分别对实验组和对照组的RNA浓度进行定量；

步骤224：采用生物分析仪分别检测实验组和对照组的RNA的完整性。