[发明专利]一种能快速检测多种分枝杆菌的方法

说明书

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种能快速检测多种分枝杆菌的方法。包括如下步骤：(1)获得患者体液样本，并对体液样本进行处理；(2)提取体液样本核酸；(3)制备试剂；(4)在反应管内加入反应混合液和体液样本核酸，离心；(5)将反应管放置在温度为65℃的环境中，使体液样本核酸发生扩增反应；(6)检测步骤(5)中得到的扩增产物，得到检测结果。本发明利用环介导等温扩增技术自建的体系可快速检测结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和偶发分枝杆菌等6种分枝杆菌，可快速实现结核病和常见非结核分枝杆菌肺病的快速检测。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种能快速检测多种分枝杆菌的方法。

背景技术

分枝杆菌属(Mycobacterium)细菌感染人类引发的重大疾病主要包括结核病(tuberculosis,TB)和近年来因发病率不断攀升而备受关注的非结核分枝杆菌病(nontuberculous mycobacterial diseases)。TB是以结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)为代表的结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosiscomplex,MTC)侵犯全身多个器官和组织引起的慢性传染性疾病，其中以侵犯肺部的肺结核(pulmonary tuberculosis,PTB)最为多见，占结核病总病例数的90％以上。TB为全球十大死亡原因之一，已超越艾滋病成为单种病原体引起死亡最多的感染性疾病。WHO《2019年全球结核病报告》显示，全球目前约有四分之一的人口感染MTB，其中5-10％将最终罹患结核病。中国的结核病发病率高居全球第二，是新增结核病例最多、多药耐药结核病发生率最高的国家之一，有效地遏制结核病的流行刻不容缓。

非结核分枝杆菌病是除MTC和麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)以外的分枝杆菌-非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)引发的疾病。NTM普遍存在于土壤和水等自然环境中，能够引起肺部、淋巴结、关节、中枢神经系统以及与导管相关的播散性感染。非结核分枝杆菌肺病(Nontuberculous mycobacterial pulmonary disease,NTM-PD)占非结核分枝杆菌病的绝大多数，发病率约为2/10万至78/10万，在全球范围内呈逐年快速增多的趋势。在一些发达国家，NTM-PD的发病率甚至已超过PTB，成为又一个由分枝杆菌引起的严重威胁人类健康的重要公共卫生问题。更为棘手的是NTM-PD的临床症状和体征(咳嗽、咳痰、咯血、胸痛、气急、盗汗、低热、乏力、消瘦和萎靡不振等)以及影像学特征与PTB十分相似，很多病例在不能及时获得有效的病原微生物学证据的情况下，极易被误诊为PTB，甚至多药耐药PTB。然而，NTM对抗结核药物的天然耐药率非常高，多数NTM对一线抗结核药物的耐药率在60％以上，个别甚至达到80％以上。一旦NTM-PD患者被误诊为PTB，按照抗结核方案治疗必将导致临床症状迁延不愈，终末期患者常因肺组织的持续破坏出现大咯血或呼吸衰竭而死亡。因此，临床诊疗中对NTM-PD和PTB疑似病例精准快速的鉴别十分重要。国内外多个指南和共识明确指出，快速可靠的病原微生物学证据，特别是对分枝杆菌精确到“种水平”的鉴定是鉴别NTM-PD和PTB的关键所在。

目前临床上广泛采用的分枝杆菌分子诊断方法多基于PCR技术和核酸杂交技术构建，因此，需要配备精密热循环装置的昂贵的PCR分析仪和核酸杂交仪，同时需根据相关法规配置完备的实验室条件以及经过严格培训的专业技术人员。且大多数此类项目临床应用中仍存在假阳性率高、检测周期过长及操作繁杂等诸多弊端。最重要的是，基于PCR技术和杂交技术的现行方法不能快速检测结核病和常见分枝杆菌肺病。

发明内容

本发明提供了一种能快速检测多种分枝杆菌的方法。本发明利用环介导等温扩增技术自建的体系可快速检测结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和偶发分枝杆菌等6种分枝杆菌，可快速实现结核病和常见非结核分枝杆菌肺病的快速检测。

本发明通过下述技术方案实现：