[发明专利]一种β-烟酰胺单核苷酸的脱盐方法

说明书

本发明公开了一种β‑烟酰胺单核苷酸的脱盐方法。该方法为将含无机盐和β‑烟酰胺单核苷酸的反应液调节至特定的pH，流经装有特定的离子交换树脂的分离柱，用水洗脱，再进行纳滤得到脱盐的β‑烟酰胺单核苷酸水溶液。本发明脱盐得到的β‑烟酰胺单核苷酸水溶液可直接经过无菌过滤后冻干生产食品级β‑烟酰胺单核苷酸冻干粉。

技术领域：

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种β-烟酰胺单核苷酸的脱盐方法。

背景技术：

烟酰胺单核苷酸也叫β-烟酰胺单核苷酸(β-Nicotinamide Mononucleotide，β-NMN)，结构如化合物Ⅰ所示。

β-烟酰胺单核苷酸在人体细胞能量生成中扮演重要角色，参与细胞内NAD⁺(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，细胞能量转化的重要辅酶)的合成，是NAD⁺的关键前体之一。DavidScinclair研究团队在文献Science,2017,355,1312-1317中报道，NAD⁺在小鼠体内的增加，能够使得大龄小鼠的组织和肌肉衰老迹象被延缓，这项研究工作使得人类向实现长寿梦想迈进了一大步。NAD⁺分子量过大，口服吸收利用率低。但随着对NAD⁺前体小分子物质β-烟酰胺单核苷酸的研究发现服用β-烟酰胺单核苷酸可以有效提升体内NAD⁺的浓度并显著改善人体新陈代谢，使得β-烟酰胺单核苷酸成为了“不老神药”。这也促使全球医药、食品、化妆品界科研人员不断的对β-烟酰胺单核苷酸进行研究与开发。

关于β-烟酰胺单核苷酸的制备方法的报道很多，主要有化学合成、发酵和酶法制备三类。其中酶法制备因其成本低廉、生产安全、环境友好，更是大家关注的焦点。但是，β-烟酰胺单核苷酸生物转化生产工艺中，采用大量的无机盐，包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠以及氯化镁等做为缓冲盐或生物反应微量元素，导致粗产品中二价和三价盐含量高，难脱除。

如果采用常规的离子交换方法，由于产品中含有类似的磷酸基团和阳离子结构，产物得不到有效分离。

如果采用膜分离技术，由于产物分子量小，在可选择的纳滤膜范围内，二价和三价盐透过率低，除盐效果不好。

因此，我们需要开发一种简单易操作的β-烟酰胺单核苷酸的脱盐方法。

发明内容：

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简单易于产业化的烟酰胺单核苷酸的脱盐方法。

本发明提供一种β-烟酰胺单核苷酸的脱盐方法，具体包括如下步骤：用盐酸将含无机盐和β-烟酰胺单核苷酸的反应液pH值调节至2.5～3.0，然后流经装有强碱性阴离子交换树脂的分离柱，用水洗脱，得到的流出液用氢氧化钠水溶液调节pH值至7.5～8.0，再流经装有强酸性阳离子交换树脂的分离柱，用水洗脱，得到的流出液进行纳滤，得到脱盐的β-烟酰胺单核苷酸水溶液。

进一步，所述含无机盐和β-烟酰胺单核苷酸的反应液为来自生物法制备的反应液，其中含无机盐约100g/L，含β-烟酰胺单核苷酸30g/L。

进一步，所述的盐酸浓度为2～3mol/L。

更进一步，所述强碱性阴离子交换树脂选自201*4、201*7、201*7U、JK206、202、D202、D213、WDA-OH等，优选强碱性阴离子交换树脂D202。

进一步，所述氢氧化钠水溶液浓度为2～3mol/L。

更进一步，所述强酸性阳离子交换树脂选自001*1-16、D001、JK006、WDC-H等，优选强酸性阳离子交换树脂D001。

进一步，所述得到脱盐的β-烟酰胺单核苷酸水溶液中的盐含量小于0.1g/L，含β-烟酰胺单核苷酸为80～100g/L。