[发明专利]一种循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法

权利要求书

1.一种循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）第一步酶催化反应：利用酮还原酶将丙酮还原为异丙醇，同时将NADPH/NADH转化成NADP+/NAD+，为7-α类固醇脱氢酶7-αHSDH催化鹅去氧胆酸CDCA生成7-羰基石胆酸7-KLCA提供NADP+/NAD+；获得第一步酶反应液；

（2）第二步酶催化反应：利用异丙醇脱氢酶将异丙醇氧化为丙酮，同时将NADP+/NAD+转化成NADPH/NADH，为7-β类固醇脱氢酶7-βHSDH催化7-KLCA生成熊去氧胆酸UDCA提供NADPH/NADH。

2.根据权利要求1所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，步骤（1）的过程为：丙酮溶于水中，然后加入CDCA搅拌溶解，然后加入NADP+/NAD+，控制反应体系温度及pH，再加入酮还原酶和7-αHSDH，反应，生成产物7-KLCA。

3.根据权利要求2所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，所述的酮还原酶和7-αHSDH为固定化酶。

4. 根据权利要求1或2所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，第一步酶催化反应的各物料质量比例为酮还原酶:丙酮:NADP+/NAD+:7-αHSDH:CDCA = 0.1-0.2:2-3:0.0001-0.0005:0.2-0.5:1；其中CDCA的质量浓度为5%-20%。

5. 根据权利要求2所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，反应条件为温度25-37℃，pH 6-7.5；反应过程中液相检测CDCA和7-KLCA的含量，当底物反应98%以上时结束反应。

6.根据权利要求1所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，反应结束后，从第一步酶反应液中过滤回收固定化酶，剩下的反应液准备第二步酶反应。

7.根据权利要求1所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，步骤（2）的过程为：向第一步酶反应液中添加异丙醇，控制反应体系温度及pH，再加入异丙醇脱氢酶和7-βHSDH，生成产物UDCA；优选地，所述的异丙醇脱氢酶和7-βHSDH为固定化酶。

8.根据权利要求1或7所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，第二步酶催化反应中，物料添加的质量比例为异丙醇脱氢酶:异丙醇:7-βHSDH:7-KLCA=0.2-0.5:1:0.2-0.5:1。

9. 根据权利要求7所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，反应条件为温度25-37℃，pH 6-7.5；反应过程中用液相检测7-KLCA和UDCA的含量，当底物反应98%以上时结束反应。

10.根据权利要求1所述的循环酶催化制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，反应结束后过滤回收固定化酶，剩下的反应液，抽真空，将反应体系中的丙酮、异丙醇去掉；然后用等体积乙酸乙酯萃取，合并有机相，抽真空去溶剂，得到熊去氧胆酸UDCA。