[发明专利]一种热启动DNA聚合酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种热启动DNA聚合酶，其特征在于，将双酸酐对DNA聚合酶进行修饰，得到热启动DNA聚合酶；

所述双酸酐的结构通式如式I所示：

R1和R2均为氢或有机基，所述有机基包括氢、烷基、氨基、磺酸基或卤素。

2.根据权利要求1所述的热启动DNA聚合酶，其特征在于，所述双酸酐包括1,2,3,4-苯四甲酸二酸酐、3,6-二氯-1,2,4,5-苯四甲酸二酸酐、3,6-二甲基-1,2,4,5-苯四甲酸二酸酐、3,6-二羟基-1,2,4,5-苯四甲酸二酸酐和均苯四甲酸二酐中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的热启动DNA聚合酶，其特征在于，所述DNA聚合酶包括Taq DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶、KOD DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶和phi29 DNA聚合酶中的一种或几种。

4.权利要求1～3任一项所述的热启动DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，包括：将双酸酐溶液与DNA聚合酶溶液混合，得到混合液，将所述混合液在1～6℃下处理8-24h，得到热启动DNA聚合酶。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述混合液中双酸酐和DNA聚合酶的摩尔比为200～1000:1。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述处理的温度为4℃。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述双酸酐溶液的溶剂包括二甲基亚砜。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述DNA聚合酶溶液的溶剂包括Tris缓冲液；所述Tris缓冲液的组分包括50mM Tris-HCl、1mM EDTA和50mM KCl，pH值为7.5。

9.权利要求1～3任一项所述的热启动DNA聚合酶在核酸扩增反应中的应用。