[发明专利]一种评估他克莫司药物代谢的引物组、试剂盒及评估方法

权利要求书

1.一种评估他克莫司药物代谢的引物组，其特征在于：包含引物对1、引物对2、引物对3、引物对4及引物对5，

所述引物对1的序列为：F: 5’-ATTAGACACGCAAGGACTTCTTCA-3’；R: 5’-TCAAGAAAGCTGTGCCCCAG-3’；

所述引物对2的序列为：F: 5’-TCGAAAGAAACTGAGTCCCACAA-3’；R: 5’-TGCTATGTGGCAAAAATTCTCATC-3’；

所述引物对3的序列为：F: 5’-TCGGAGCCCTCGGAGC-3’；R: 5’-AGGCACATCCTGGCCATC-3’；

所述引物对4的序列为：F: 5’-CGGTCCTGTCCCTGTTTCTG-3’；R: 5’-ACCGTAGGTGGCCATGCA-3’；

所述引物对5的序列为：F: 5’-ACAGGTCCACCCCAACTCTG-3’；R: 5’-ACCCTTCATAGGCTTCATCCAG-3’。

2.一种评估他克莫司药物代谢的试剂盒，其特征在于：包括总RNA提取试剂、PCR扩增试剂以及测序试剂，所述PCR扩增试剂包括权利要求1所述的引物组。

3.一种非诊疗目的的他克莫司药物代谢相关基因型的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）总RNA提取：取受试者的全血标本，进行总RNA提取；

2）PCR扩增：取上述步骤1）提取的总RNA，加入PCR扩增试剂进行PCR扩增得到扩增片段；

3）测序：取步骤2）中扩增得到的片段进行测序，测序结果进行分析，确认该受试者中他克莫司药物代谢相关基因型；所述他克莫司药物代谢相关基因型包括CYP3A5 rs15524、CYP3A5 rs4646453、POR rs2286822、POR rs1135612及POR rs1057868 五个位点的基因型；

所述步骤2）中所采用的PCR扩增试剂包括权利要求1所述的引物组。

4. 根据权利要求3所述的一种非诊疗目的的他克莫司药物代谢相关基因型的检测方法，其特征在于：PCR扩增反应体系为：第一链cDNA 2μL；上游引物2μL；下游引物2μL；dNTP 4μL；10×PCR buffer 5μL；Taq 酶1μL，用双蒸水补足总体积达50μL。

5.根据权利要求3或4所述的一种非诊疗目的的他克莫司药物代谢相关基因型的检测方法，其特征在于：在PCR扩增过程中加入内参特异性引物。

6.根据权利要求5所述的一种非诊疗目的的他克莫司药物代谢相关基因型的检测方法，其特征在于：所述测序结果分析通过htSNPer1.0软件进行。

7.一种非诊疗目的的评估他克莫司药物代谢状态的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）确定受试者的基因型：通过权利要求6所述的检测方法确认CYP3A5 rs15524、CYP3A5rs4646453、POR rs2286822、POR rs1135612及POR rs1057868五个位点的基因型；

2）根据测定的基因型计算他克莫司血药浓度/单位体重剂量比，计算公式如下：

他克莫司血药浓度/单位体重剂量比Y=41.474+7.437×性别+0.286×年龄+9.879×肾功能延迟恢复-8.554×rs15524基因型+8.878×rs4646453基因型-23.462×rs1135612基因型+26.243×rs2286822基因型-1.167×rs1057868基因型+0.059×移植后时间，

公式中各参数赋值如下：

所述年龄用岁来计算，所述移植后时间用天来计算；

性别：当受试者为女性时，性别=0，当受试者为男性时，性别=1；

肾功能延迟恢复：当受试者未发生肾功能延迟恢复时，肾功能延迟恢复=0；当受试者发生肾功能延迟恢复时，肾功能延迟恢复=1；

rs15524基因型：当受试者的rs15524基因型为TT时，rs15524基因型=0；当受试者的rs15524基因型为TC时，rs15524基因型=1；当受试者的rs15524基因型为CC时，rs15524基因型=2；

rs4646453基因型：当受试者的rs4646453基因型为TT时，rs4646453基因型=0；当受试者的rs4646453基因型为TC时，rs4646453基因型=1；当受试者的rs4646453基因型为CC时，rs4646453基因型=2；

rs1135612基因型：当受试者的rs1135612基因型为CC时，rs1135612基因型=0；当受试者的rs1135612基因型为CT时，rs1135612基因型=1；当受试者的rs1135612基因型为TT时，rs1135612基因型=2；

rs2286822基因型：当受试者的rs2286822基因型为AA时，rs2286822基因型=0；当受试者的rs2286822基因型为AG时，rs2286822基因型=1；当受试者的rs2286822基因型为GG时，rs2286822基因型=2；

rs1057868基因型：当受试者的rs1057868基因型为CC时，rs1057868基因型=0；当受试者的rs1057868基因型为CT时，rs1057868基因型=1；当受试者的rs1057868基因型为TT时，rs1057868基因型=2。