[发明专利]Hsp16-3过表达的结核分枝杆菌H37Ra菌株的构建及其应用在审
| 申请号： | 202011278428.4 | 申请日： | 2020-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN112280729A | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | 张万江;李垚;陈雪峰;王菊;张春军;张杰;董江涛;吴芳;吴江东;柳小玲;梁粟 | 申请（专利权）人： | 石河子大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/31;C12N15/74;C12R1/32 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 832002 新疆维*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | hsp16 表达 结核 分枝杆菌 h37ra 菌株 构建 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16-3（以下简称Hsp16-3）过表达的结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌（以下简称H37Ra菌）菌株的构建，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1. 大肠杆菌-结核杆菌重组穿梭质粒载体pMV361- Hsp16-3的构建及鉴定
首先，接种及培养结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株(以下简称H37Rv菌)；第二，提取和鉴定H37Rv菌基因组DNA；第三，以H37Rv菌基因组DNA为模板，PCR扩增结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16-3基因，并纯化和回收PCR扩增产物；第四，以大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV361为载体，构建及鉴定大肠杆菌-结核杆菌重组穿梭质粒载体pMV361- Hsp16-3；
步骤2. Hsp16-3过表达的H37Ra菌株的构建及鉴定
利用电穿孔技术，将构建的大肠杆菌-结核杆菌重组穿梭质粒载体pMV361- Hsp16-3，转入H37Ra菌内，经Realtime-PCR技术检测及鉴定，成功构建Hsp16-3过表达的H37Ra菌株。
2.根据权利要求1所描述的Hsp16-3过表达的H37Ra菌株的应用，其特征在于，为研究Hsp16-3对H37Ra菌的致病性、免疫保护作用等方面的调控机制，以及新型结核病疫苗研发奠定基础。
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