[发明专利]sPRR-His对小鼠呋塞米饮水诱导的肾素活性影响的试验方法

说明书

本发明公开了一种sPRR‑His对小鼠呋塞米饮水诱导的肾素活性影响的试验方法，通过颈总静脉灌注sPRR‑His重组蛋白预处理C57BL/6J小鼠3天，然后用呋塞米饮水处理C57BL/6J小鼠处理1周，检测小鼠血浆中sPRR含量、肾素活性；或者皮下包埋渗透微泵给药PF‑429242预处理C57BL/6J小鼠3天，然后用呋塞米饮水处理C57小鼠一周，检测小鼠血浆中肾素总含量、肾素活性和sPRR，检测小鼠肾脏皮质肾素mRNA表达；或在用呋塞米饮水处理C57BL/6J小鼠同时给予皮下包埋PF‑429242干预基础上，通过颈总静脉灌注sPRR‑His进行rescue试验，检测小鼠血浆肾素活性；通过小鼠呋塞米饮水试验构建肾素活化模型，通过试验结果明确sPRR‑His对血浆肾素分泌和肾素活性具有负反馈抑制作用。

技术领域

本发明涉及一种探讨肾素活性影响机制的试验方法，尤其涉及一种sPRR-His对小鼠呋塞米饮水诱导的肾素活性影响的试验方法。

背景技术

Circulation的一篇文章公布了关于2012年～2015年中国高血压状况的全国性调查结果。该结果显示，按照2010版《中国高血压防治指南》的标准，18岁以上的中国成年人口中高血压的发病率为23.2％(约2.45亿人)，处于高血压前期的占41.3％(约4.35亿人)。高血压治疗一直是以血压的控制为主，研究发现高血压出现与肾素有关，肾素是人体内最重要的血压调节激素之一。肾素是一种天冬氨酰蛋白酶，它是通过催化肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin-system，RAS)活化的第一步也就是血管紧张素原(angiotensinogen，AGT)转化为血管紧张素I(angiotensin I，Ang I)这一限速步骤，从而在血压控制和电解质调节中扮演重要的角色。肾脏的肾小球旁(juxtaglomerular apparatus cells，JG)细胞是循环肾素的主要来源。肾脏中肾素的生物合成受多种因素的共同调节，包括氯化钠浓度、血压、交感神经活性和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)等。例如袢利尿剂呋塞米可通过抑制肾脏髓袢升支粗段Na-K-2Cl同向转运蛋白，导致钠离子浓度降低，从而使肾素分泌增加。

肾素原受体((pro)renin receptor，PRR)是RAS的新成员，它已经成为水盐代谢、血压和肾脏局部RAS调节的关键因子。蛋白酶介导PRR切割产生细胞外域的可溶性肾素原受体(soluble PRR,sPRR)。循环系统sPRR被广泛认为是许多人类疾病的生物标记，如妊娠糖尿病、肾小管间质纤维化等。在关于弗林蛋白酶(furin protease)和解整合素样金属蛋白酶19(ADAM 19)作为PRR切割酶的争议性研究之后，出现了坚实的证据支持S1P(site1protease，又称为SKI-1，PCSK8，MBTPS1)作为切割生成sPRR的主要蛋白酶。这些结果为未来研究S1P来源的内源性sPRR的生物学功能提供了一个新的平台。经过研究发现sPRR由集合管闰细胞产生，通过旁分泌的方式影响邻近的主细胞的水钠转运功能，从而对血容量与血压产生调节作用，并阐明了sPRR的产生机制。一种重组的、带有组氨酸标记的sPRR，称为sPRR-His，能通过激活位于集合管主细胞顶膜的frizzled-8受体激动β-连环蛋白(β-catenin)通路，参与水通道蛋白2的调控，影响尿液浓缩功能。研究发现S1P酶来源的sPRR可以靶向血管加压素V2受体，从而增强小鼠尿液浓缩能力。另外，研究发现S1P对于醛固酮诱导的上皮钠离子通道蛋白(epithelial sodium channel,ENaC)激活也是必要的。

尽管通过研究已经发现sPRR在高血压和肾脏水钠潴留的调节中可能发挥重要作用，但目前这方面的发现和研究仍然还是都非常有限。研究发现肾单位特异性敲除PRR小鼠血浆中的肾素活性与野生型小鼠相比明显升高，这提示我们PRR可能影响循环系统的肾素活性，但PRR尤其是sPRR与肾素的相互调节机制是不清楚的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供三种sPRR-His对小鼠呋塞米饮水诱导的肾素活性影响的试验方法。