[发明专利]一种检测水胺硫磷的试纸条及方法

权利要求书

1.一种检测水胺硫磷的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有水胺硫磷半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有水胺硫磷单克隆抗体-胶体金标记物；所述水胺硫磷单克隆抗体是以水胺硫磷半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述水胺硫磷半抗原-载体蛋白偶联物由水胺硫磷半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白；

其特征在于所述水胺硫磷半抗原的合成方法为：1)取4-硝基水杨酸1.83g，加入20mL异丙醇溶解，充分搅拌，加入0.5mL浓硫酸，室温搅拌3h，停止反应，加入200mL水，再加入100mL乙酸乙酯萃取，有机相加100mL水震荡、洗涤，浓缩蒸干，得到4-硝基水杨酸异丙酯；

2)在4-硝基水杨酸异丙酯中直接加入80mL二氯甲烷溶解，加入1.64g O-甲基硫代磷酰二氯，充分搅拌，加入3mL三乙胺，室温搅拌4h，停止反应，加入100mL水，补加100mL二氯甲烷萃取，有机相加60mL饱和食盐水震荡、洗涤，浓缩蒸干，上硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇体积比为10:1的混合溶剂洗脱分离，得到4-硝基水杨酸异丙酯硫磷；

3)在4-硝基水杨酸异丙酯硫磷中直接加入100mL二氯乙烷溶解，在搅拌下通入氨气，室温反应2h，停止反应，加水50mL×3，洗涤3次，有机相浓缩蒸干，得到硝基水胺硫磷；

4)在硝基水胺硫磷中直接加入100mL甲醇溶解，加入0.5g润湿的钯-碳，排尽空气，通入氢气，室温搅拌2h，停止反应，抽滤，蒸干，上硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇体积比为5:1的混合溶剂洗脱分离，得到水胺硫磷半抗原，其分子结构式为：

2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上。

3.如权利要求1-2任一项所述的试纸条，其特征在于所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。

4.一种制备权利要求1-3任一项所述试纸条的方法，其包括步骤：

1)制备喷涂有水胺硫磷单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2)制备具有包被有水胺硫磷半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

5.一种检测果蔬样本中水胺硫磷残留的方法，其包括步骤：

1)样品前处理；

2)用权利要求1-3任一项所述的试纸条进行检测；

3)分析检测结果。