[发明专利]用于乳粉化学危害物筛查的基粉液质数据库

权利要求书

1.一种进行乳粉化学危害物质筛查的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)乳粉前处理；

(2)使用液相色谱-级联质谱对乳粉成分进行检测；

(3)将一级质谱信息与基粉液质数据库进行比对，确认非基粉成分后与危害物数据库比对，确认化学危害物添加；所述的基粉液质数据库中的数据如表2所示；

步骤(1)所述的乳粉前处理步骤包括：

1)精密称取乳粉，加入去离子水充分搅拌至完全溶解，配制混合乳液，放置4℃保存；

2)混合乳液中加入冰乙腈，涡旋振荡后，8000g离心5min后取上清溶液，上清液脱脂处理；3)提取上清液后剩余液体中加入MgSO₄和NaCl，涡旋振荡混匀后，进行盐析，5000g离心3min后取上清溶液；

4)步骤3)的上清液与步骤2)中的脱脂上清液混合后，涡旋振荡混匀，5000g离心3min取上清液，氮气流吹干后，用体积比1:1的甲醇/水复溶，至滤器中过滤；

步骤(2)所述的使用液相色谱-级联质谱对乳粉成分进行检测的步骤为；

液相色谱的方法为：

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱；

流动相：

1)正离子模式：A液：0.1％甲酸-5mM甲酸铵-水溶液，B液：0.1％甲酸-乙腈；

2)负离子模式：A液：5mM甲酸铵-水溶液，B液：乙腈；

梯度洗脱，正负离子洗脱程序相同，洗脱程序为；

流速：0.2mL/min；

柱温：40℃；

进样量：20μL；

级联质谱的方法为：

离子源：ESI源；

采集方式及参数设置：

Ⅰ、TOF MS-DIA-Product Ion，正/负离子检测，具体参数如下：

TOF MS扫描质量数范围：50-1200Da；

TOF MS采集累积时间：0.25s；

IDA采集阈值：100cps；

Product Ion采集累积时间：0.075s；

电喷雾电压：5500V/-4500V；

解聚电压：80V；

碰撞能量：35±15/-35±15；

离子源温度：500℃；

雾化气压力：50psi；

气帘气压力：30psi；

辅助气压力：50psi；

Ⅱ、Sequential Windowed Acquisition of All Theoretical Fragment Ion，正/负离子检测，具体参数如下：

碰撞能量：35±15/-35±15；

喷雾电压：5500V/-4500V；

离子源温度：500℃；

雾化气压力：50psi；

气帘气压力：30psi；

辅助气压力：50psi；

Ⅲ、SWATH采集包含TOF MS扫描200ms和11个SWATH/每个50ms扫描窗口。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

1)每克乳粉加入125ml去离子水配制混合乳液；

2)混合乳液和冰乙腈的体积比为1：3，提取的上清液的量为混合液的1/5至1/4，脱脂处理的方法为使用除脂萃取管进行脱脂；

3)MgSO₄的加入量为剩余液体量质量比的1/7至1/6；NaCl的加入量为剩余液体的1/35至1/30；取上清液的量约为盐析后溶液体积的1/4至1/3；

4)提取的上清液的量为混合液的1/3至1/2，氮气吹干时的温度为40℃，所述的滤器为Mini-UniPrep非针头式滤器

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，

1)SWATH采集包含TOF MS扫描200ms和11个SWATH/每个50ms扫描窗口；

2)基粉样品IDA扫描数据通过运算得到：

11个SWATH模式扫描窗口，m/z：100-269.4、268.4-344.2、343.2-398.1、397.1-459.1、458.1-509.2、508.2-551.5、550.5-610.4、609.4-681.3、680.3-762.7、761.7-887.5、886.5-1200；

11个负离子模式扫描窗口，m/z：100-198.4、197.4-247.4、246.4-291.4、290.4-337.6、336.6-382.7、381.7-435.5、434.5-505.9、504.9-566.9、565.9-653.2、652.2-791.8、790.8-1200；

3)采集的样品SWATH数据首先确认色谱峰保留时间和相应强度是否一致，如出现偏差较大的数据需要剔除；将SWATH数据进行二级质谱解卷积，设置参数如下：

数据采集MS1和MS2质量偏差容许分别为0.01Da和0.025Da；

数据采集时间范围是1.5min-28min；

MS1和MS2采集范围分别是100-1200Da和50-1200Da；

最大电荷数为2；

最小峰高为500cps；

质量块宽度为0.1Da；

MS2解卷积丰度扣除为10cps；

正离子扫描模式的加合离子为[M+H]⁺、[M+NH₄]⁺、[M+Na]⁺、[M+CH₃OH+H]⁺、[M+H-H₂O]⁺、[M+2H]²⁺、[M+CH3OH+H]²⁺、[M+H]²⁺、[M+H-2H2O]²⁺、[M+HCOOH+H]⁺、[M+H-H2O]²⁺、[M+Na]²⁺、[M+NH4]²⁺；

负离子扫描模式的加合离子为[M-H]^-、[2M-H]^-、[M+Cl]^-、[M-H₂O-H]^-、[2M-H]^2-、[M+Na-2H]^-、[M+Na-2H]^2-、[M+NH3-H]^-、[M-2H]^2-、[M+FA-H]^-、[M+Na-2H]^-、[M+K-2H]^-。