[发明专利]一种肺腺癌药物黄金靶点超级增强子及其筛选方法与应用

说明书

本发明属于超级增强子技术领域，公开了一种肺腺癌药物黄金靶点超级增强子及其筛选方法与应用，确认HDAC4‑SE是超级增强子区域；确定HDAC4‑SE的核心增强子片段为P7；敲除HDAC4‑SE可增加肺腺癌耐药株的体外化疗敏感性。本发明前期研究发现，HDAC4基因区间内存在超级增强子HDAC4‑SE，本发明在前期研究的基础上，采用慢病毒基因过表达、CRISPR/CAS9基因编辑技术发现超级增强子HDAC4‑SE参与调控肺腺癌化疗耐药，超级增强子HDAC4‑SE的发现为逆转肺腺癌化疗耐药提供新的思路，具有广阔的研发前景，有望成为药物研发的黄金靶点。

技术领域

本发明属于超级增强子技术领域，尤其涉及一种肺腺癌药物黄金靶点超级增强子及其筛选方法与应用。

背景技术

目前，肺癌是全球范围内发病率和死亡率位居首位的恶性肿瘤，是严重危害人类健康的重大公共卫生问题，其中，肺腺癌是肺癌的最主要病理类型。近年来，虽然肺腺癌的治疗选择有很多，但患者的5年生存率仍只有20％左右。化疗仍然是治疗中晚期肺腺癌的基石。然而，临床观察发现，由于化疗耐药，许多肺腺癌患者很快会出现病情进展。因而，探索肺腺癌化疗耐药的潜在机制，寻找逆转肺腺癌化疗耐药的新策略，对肺腺癌患者的临床治疗具有重要的意义。

超级增强子在肿瘤致病机理探索研究中显示出巨大的应用潜力，具有广阔的研发前景，有望成为药物研发的黄金靶点。但现有技术中关于肺腺癌药物黄金靶点超级增强子及其筛选的技术方案尚未见报道。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术中关于肺腺癌药物黄金靶点超级增强子及其筛选的技术方案尚未见报道。目前，肺腺癌药物研发的靶点集中在各种类型的基因突变产生的改变上，如EGFR突变，ALK突变，ROS1融合等。治疗过程中靶向基因的二次突变将导致治疗效果大打折扣，病情进展

解决以上问题及缺陷的难度为：对于二次突变产生的肺腺癌耐药性状，目前主要通过测序获得突变种类，选择适用的二代三代药物，新的突变类型及有效靶向药物的发现十分困难。从而我们另辟蹊径，从基因的调控出发寻找并鉴定有效的肺腺癌相关的超级增强子。

解决以上问题及缺陷的意义为：能否寻找到不同于基因突变的诱因，肺腺癌调控的超级增强子，将有助于我们开发新的靶向肺腺癌治疗策略，使肺腺癌超级增强子被抑制，从而抑制肺腺癌的进展。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种肺腺癌药物黄金靶点超级增强子及其筛选方法与应用。

本发明是这样实现的，一种肺腺癌药物黄金靶点超级增强子的筛选方法，所述肺腺癌药物黄金靶点超级增强子的筛选方法包括以下步骤：

步骤一，确认HDAC4-SE是超级增强子区域。

步骤二，确定HDAC4-SE的核心增强子片段为P7。

步骤三，敲除HDAC4-SE可增加肺腺癌耐药株的体外化疗敏感性。

进一步，步骤一中，所述确认HDAC4-SE是超级增强子区域的方法，包括：

对ENCODE数据库中现有的ChIP测序结果进行分析，HDAC4基因区间“chr2:240142073-240271252”内存在多个连续的增强子，即超级增强子，记为HDAC4-SE，且为H3K27ac和H3K4mel高丰度区域，并检索在线数据库dbSUPER:http://asntech.org/dbsuper/search.php，确认HDAC4-SE是超级增强子区域。

进一步，步骤二中，所述确定HDAC4-SE的核心增强子片段为P7的方法，包括：