[发明专利]一种大肠杆菌生产SUMO酶的发酵工艺

权利要求书

1.一种大肠杆菌生产SUMO酶的发酵工艺，其特征在于：包括以下步骤；

第一步：菌种活化：取3支已灭菌的试管，试管内装有4ml LB培养基，并分别向3支试管接入10μL菌种和2μL卡那霉素，然后在温度为37℃和转速为200rpm的条件下振荡培养；取出已灭菌的1.5mL EP管，并向EP管中加入500μL已灭菌的50％甘油；当试管中培养物OD₆₀₀＝0.6-0.8时，取出试管，从试管中取出500μL培养物加入至EP管中，将EP管放入-4℃保存，得到保种菌；

第二步：种子液制备：取2L三角瓶，加入1000mlLB培养基灭菌，接入500μL卡那霉素和1ml保种菌，在温度为37℃和转速为200rpm的条件下振荡培养至OD₆₀₀＝0.6-0.8，得到种子液；

第三步：补料培养基制备：按照以下重量份：甘油1-3％，酵母浸膏粉9-11g/L，胰蛋白胨9-11g/L，MgSO₄5-7g/L配置2L的培养基，然后加入补料瓶高压灭菌，得到补料培养基备用；

第四步：发酵液制备：按照以下重量份：甘油1％，酵母浸膏粉24g/L，胰蛋白胨10-14g/L，K₂HPO₄7.4-11.4g/L，KH₂PO₄0.8-1.5g/L，MgSO₄1-3g/L，微量元素混合液0.5-1.5ml/L，消泡剂0.1-0.3ml/L配置9L的培养基，然后加入发酵罐中121℃高压灭菌20min；

第五步：发酵工艺：待发酵罐温度降至37℃，接入1L种子液和5ml卡那霉素，在罐压0.06MPa、温度37℃、PH7.0的条件下培养至OD₆₀₀＝3.0-3.5，然后将罐温降至16℃，在降温过程中搅拌转速和通气量以维持DO在28％-32％，待温度降至16℃，加入最终浓度为0.5mM的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷进行诱导，放罐后以8000rpm的速度离心10min收集培养基中的菌体进行纯化。

2.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌生产SUMO酶的发酵工艺，其特征在于，在第四步中，微量元素混合液由以下重量份原料组成:FeCL₃28-32g/L、ZnSO₄4.8-8.8g/L、CuSO₄4.8-8.8g/L、CaCL₂2.8-6.8g/L、VB10-14g/L、MnSO₄7.8-11.8g/L。

3.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌生产SUMO酶的发酵工艺，其特征在于，在第五步中，培养时通风比由0.5vvm提升至1.5vvm，搅拌转速由100rpm提升至500rpm。

4.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌生产SUMO酶的发酵工艺，其特征在于，在第五步中，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷进行诱导的时间为16小时，诱导过程中根据养分消耗情况进行补料，保持DO在28％-32％，并根据菌体生长情况调节PH，维持PH6.7-7.0。