[发明专利]一种Prep-HPLC制备竹叶黄酮中四种单体的方法

说明书

本发明公开了一种Prep‑HPLC制备竹叶黄酮中四种单体的方法，包括提取、干燥、溶解、制备液相纯化和蒸馏分离五个步骤，最终得到荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷粉末。本发明具有工艺简单、时间短、纯度高等优点。

技术领域

本发明涉及生物质提取技术领域，具体是一种Prep-HPLC制备竹叶黄酮中四种单体的方法。

背景技术

竹子为禾本科(Gramineae)竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物，有着非常丰富的次生代谢物。竹叶在中国具有悠久的药食使用历史，具有清热除烦，利尿的功效，多用于热病烦渴，口舌生疮，小便赤色淋痛等症。其药效在《本草纲目》、《本经逢原》中均有详细记载。

竹子主要的活性成分有黄酮类及其甙类、活性多糖类、特种氨基酸及其衍生物等与人体生命活动有关的化合物；含有锰、锌、硒、锗、硅等多种能活化人体细胞的元素,这些物质构成了竹叶黄酮广泛的生理和药理活性的基础。

黄酮类化合物(flavonoids)又称类黄酮，是一大类植物多酚类次生代谢物，广泛存在于药材、水果、茶叶等之中，数量之多可列天然酚性化合物之首。它是一种人体需要而不能自身合成的植物活性成分，也是众多中草药如黄芩、银杏、沙棘等的主要功能因子。目前己经发现不同结构的黄酮类化合物约4000种。

竹叶中黄酮类化合物主要以苷类形式存在，以黄酮糖苷类的形式最为常见，并以碳苷黄酮为主。竹叶黄酮含量会随着竹叶的品种、产地、生长年限及采摘季节等条件的不同而存在差异。

竹叶黄酮有着显著的抗氧化、清除自由基、调节血脂抗肿瘤、阻断亚硝化反应、抗衰老、抗心血管疾病、抗炎抗菌、增强免疫力及抗辐射等功效。

竹叶黄酮是从以毛金竹几为代表的刚竹属品种的叶子中分离得到的、具有我国我国本土资源特色和自主知识产权的新型植物黄酮制剂,原料来源丰富、制剂品质稳定、风味清香平和。竹叶黄酮具有优良的清除活性氧自由基、抗脂质过氧化、调节血脂、抗辐射、抗疲劳、抗肿瘤、抑菌、消炎及保护心脑血管等生物学功效。竹叶抗氧化物,是以竹叶黄酮为主要成份的竹叶酚性部位,年被批准列入《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》国标一,目前已被核准在食用油脂、肉制品、水产品、膨化食品、油炸食品、焙烤食品、即食谷物和果蔬汁肉饮料、茶饮料等八大类食品体系中使用最大使用量为万分之五。

竹叶黄酮的提取与分离也是依据化合物相似相溶的原理。竹叶中所含的类黄酮主要是黄酮糖昔,具有较大的极性和亲水性,故可以选择热水、甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮等溶剂进行浸提。水提的缺点是溶剂的极性过大,且易于将蛋白质、糖类等杂质带出来,影响下一步的分离和纯化，而甲醇具有较大的毒性,不利于工业化生产时的过程控制,所以通常选用安全和经济的乙醇-水溶液作为浸提及洗脱溶剂。竹叶黄酮的提取方法目前主要有热回流提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等。

竹叶碳苷黄酮的代表性化合物为荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷，关于竹叶黄酮单体分离、纯化、制备方面的研究报道很少，仅见研究者以越南巨竹叶为试验材料，采用乙醇浸提，提取物得率为2.04％。有研究报道利用大孔树脂和聚酰胺对毛竹叶提取物进行处理，最终得到四种单体在竹叶黄酮粉末中的纯度为76.939mg/g，即四种单体中竹叶黄酮中的含量仅为7.69％。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种Prep-HPLC制备竹叶黄酮中四种高纯度单体的方法，该方法制备竹叶黄酮中四种高纯度单体具有工艺简单、时间短、纯度高等优点，该方法非常适用于竹叶黄酮中四种单体的分离制备。

为解决上述技术问题，本发明采取了如下的技术方案：

一种Prep-HPLC制备竹叶黄酮中四种单体的方法，包括以下步骤：

(1)提取：将竹叶粉碎，使用体积比为50％乙醇进行提取，提取条件为：30℃、20h、原料与提取液体之间的比例为1:30，过滤得到提取液。