[发明专利]一种蜂王浆双歧杆菌粉的制备方法

权利要求书

1.一种蜂王浆双歧杆菌粉的制备方法，包括下述步骤：

1)将双歧杆菌冻干菌粉接种于MRS肉汤中，在37℃培养条件下MRS活化三次，前两次以3体积％～5体积％的接种量转接，并在37℃的条件下培养22～24h，第三次按照2体积％～3体积％的接种量转接，并在37℃的条件下培养17-19h，得到双歧杆菌菌悬液；

2)配制浓度为10-30％的水性多孔淀粉混悬液，110℃灭菌和离心除气处理后备用；

3)将步骤1)制备的菌悬液和步骤2)制备的多孔淀粉混悬液按照1:(0.6～1.2)的质量比例混合后进行离心处理，弃去上清液得双歧杆菌多孔淀粉菌泥；

4)将鲜蜂王浆按照1：(0.9-1.1)的质量比例加入到多孔淀粉中，混匀，密封放置6小时，得到蜂王浆多孔淀粉泥；

5)将步骤3)制备的双歧杆菌多孔淀粉菌泥按照1:(1～3)质量比例和步骤4)蜂王浆多孔淀粉泥充分混匀，得到蜂王浆双歧杆菌泥；

6)向步骤5)的蜂王浆双歧杆菌泥添加冻干保护剂，在真空度6Pa，冷冻温度-40℃条件下冻干，其中所用冻干保护剂的体积用量为蜂王浆双歧杆菌泥重量的1/3mL/g。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤2)中，所述多孔淀粉混悬液的浓度为15-25％。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤2)中，所述多孔淀粉混悬液的浓度为20％。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤4)中，鲜蜂王浆按照1:1的质量比例与多孔淀粉混合。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、甘油、低聚果糖、乳糖、胱氨酸、维生素C、水组成，其中，脱脂乳粉的浓度为0.1-0.15g/mL，甘油的浓度为0.01-0.015g/mL，低聚果糖的浓度为0.02-0.025g/mL，乳糖的浓度为0.01-0.015g/mL，胱氨酸的浓度为0.001-0.0015g/mL，维生素C的浓度为0.003-0.0035g/mL。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述冻干保护剂由脱脂乳粉100重量份、甘油10重量份、低聚果糖25重量份、乳糖12.5重量份、胱氨酸1重量份、维生素C 3重量份、水1000重量份组成。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，步骤6)的冻干过程为将待冻干的产品放入冷冻干燥机后，每半小时降温10度，降至-40度后，预冻2-5小时；真空度维持10-30pa下，按照半小时升温5-10度，逐渐升温至30度，进行冷冻干燥。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述的冻干保护剂中，胱氨酸、维生素C采用过滤除菌，其他成分采用在105℃灭菌30分钟。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，在步骤2)中的离心处理为在5000-6000r/min下离心10-30分钟。

10.一种蜂王浆双歧杆菌粉，其由权利要求1至9中任一项所述的方法制备。