[发明专利]一种靶向EGFRvIII的单链抗体及应用

说明书

本发明涉及基因工程抗体技术领域，具体涉及一种靶向EGFRvIII的单链抗体及应用。本发明利用基因工程制备并筛选的抗EGFRvIII单链抗体，所得的抗EGFRvIII单链抗体特异性较高，具有良好的生物活性，能够有效的与EGFRvIII蛋白进行结合；使用本发明的抗EGFRvIII单链抗体与抗肿瘤药物偶联之后的抗体偶联药物对多种表达EGFRvIII的癌细胞组织具有良好的靶向性，对有EGFRvIII表达的靶标细胞具有良好的杀伤效果，对于非靶标细胞的杀伤较低；并且相较于完整抗体，本发明的抗EGFRvIII单链抗体与药物偶联物能够降低完整抗体与药物偶联物在体内的清除速率，延长半衰期，从而提高药物的体内利用率，具有更好的体内药动学特性。

技术领域

本发明涉及基因工程抗体技术领域，具体涉及一种靶向EGFRvIII的单链抗体及应用。

背景技术

EGFR是一种分子量约为170kDa的跨膜糖蛋白，也称为ErbB或HER受体，是表皮生长因子受体家族的一员。EGFR家族成员参与许多癌症进程中的血管生成、细胞分化、增殖、存活的重要信号通路，并且在正常细胞生长以及恶性转化，预防细胞凋亡，耐药性，肿瘤干细胞和多种癌症的转移中发挥重要作用。EGFR拥有很多的突变体，其中最常见的就是EGFRvIII。这种突变起源于其胞外区的外显子2-7框内缺失，导致841个编码碱基对的丢失，变为分子量只有145kDa的糖蛋白，由于缺乏胞外的L1和CR1(富含半胱氨酸)的亚结构域，因此没有被任何配体激活的能力。EGFRvIII作为组成型激活突变体，能够促进细胞内有丝分裂和生长支持信号传导，还能促进恶性肿瘤的发展，是肿瘤靶向治疗的理想靶点。目前已经在许多人类恶性肿瘤中检测到EGFRvIII的存在，包括肺癌、结肠直肠癌、多形性胶质母细胞瘤、胸腺癌和头颈癌。并且在包括正常乳腺组织在内的成人组织中，并没有发现可检测水平EGFRvIII的存在，可作为一个靶标治疗的理想靶点。

由于靶向EGFRvIII抗体常存在耐药的现象，导致目前针对EGFRvIII的靶标药物进入市场的数量非常少，主要都是抗其他类型EGFR的单链抗体及相关药物，如专利CN200910308102.9(抗EGFR单链抗体融合Gelonin重组免疫毒素及其制备方法与用途)、CN201010148069.0(一种高亲和力的抗EGFR单克隆抗体)，因此，寻找一特异性较高，用其制备的抗体偶联药物具有良好靶向性，相较于完整抗体具有更好的体内药动学特性的抗EGFRvIII单链抗体及其制备方法与应用是当务之急。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供靶向EGFRvIII的单链抗体及应用，具体是通过以下技术方案得以实现的：

一种抗EGFRvIII的单链抗体，包括重链CDR1-3和轻链CDR1-3，所述重链CDR1-3的氨基酸序列分别为：

CDR1：GFTFSKFG；

CDR2：ISTGGYYT；

CDR3：RGYSSTKEWNDY；

所述轻链CDR1-3的氨基酸序列分别为：

CDR1：TDIDDD；

CDR2：EGNSFIP；

CDR3：QQLQSFNVPLT。

进一步的，所述重链可变区的氨基酸序列为：QVQLQESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSKFGMSWVRQTPDKRLEWVATISTGGYYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARGYSSTKEWMDYWGQGTMVTVSS；

所述轻链可变区的氨基酸序列为：SDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASTDIDDDMNWYQQKPGKTPKLLIYEGNSFIPGVPSRFSGSGSGTDFIFTISSLQPEDIATYYCQQLQSFNVPLTFGGGTKVEIK。