[发明专利]一种羊栖菜中抑藻活性化合物的制备方法及用途

说明书

本发明公开了一种羊栖菜中抑藻活性化合物的制备方法及用途，其制备方法为羊栖菜干粉经85%乙醇浸提浓缩，经石油醚萃取分离得粗提物；粗提物经硅胶柱层析、凝胶柱层析及制备薄层色谱等方法对其分离纯化；经NMR及TOF‑MS共鉴定出3种对赤潮异弯藻具有良好抑制效果的化合物。本发明从羊栖菜中提取天然抑藻活性成分，获得一种利用羊栖菜的天然活性组分，属于天然成分，在水体中易于降解，不会对自然界造成二次污染，为其资源化利用提出了新的途径；同时本发明所述抑藻方法具有提取工艺简单，操作方法简便等诸多优点，该方法具有良好的抑藻效果，可以有效的去除赤潮异弯藻，为赤潮异弯藻的去除提供了新的方法。

技术领域

本发明涉及赤潮藻治理领域，尤其是涉及一种羊栖菜中抑藻活性化合物的制备方法及用途。

背景技术

羊栖菜（Sargassum fusiforme）是一种生长在温带的多年生大型经济海藻，浙江洞头县是我国羊栖菜的主产区，羊栖菜养殖具有净化环境的作用，羊栖菜养殖区附近很少有赤潮的发生。羊栖菜不仅是一种美味的食品，还富含多糖、蛋白质及微量元素等对人体有益的成分，是一种典型的药用和食用同源藻类（浙江农业科学，2014(04)：487-491）。目前，国内外对羊栖菜生物活性物质的研究，主要集中在对羊栖菜多糖降血糖、抗肿瘤、抗氧化和抗病毒等活性的研究。前期的工作中，我们发现了羊栖菜有较好的抑藻效果，但目前国内外尚未见羊栖菜抑藻物质分离纯化和鉴定的专利和文献报道, 现有的物理和化学方法治理赤潮存在成本高、二次污染和持续性不强等问题相对于这两种方法，生物法更加专一、高效，具有生物安全性。近年来，围绕大型海藻与赤潮的相互作用，科学家们做了大量的研究。研究表明，大型海藻可以直接或间接的抑制微藻的生长。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种羊栖菜中抑藻活性化合物的制备方法及用途，本发明从羊栖菜中提取天然抑藻活性成分，获得一种利用羊栖菜的天然活性组分，属于天然成分，在水体中易于降解，不会对自然界造成二次污染，为其资源化利用提出了新的途径；同时本发明所述抑藻方法具有提取工艺简单，操作方法简便等诸多优点，该方法具有良好的抑藻效果，可以有效的去除赤潮异弯藻，为赤潮异弯藻的去除提供了新的方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：本发明提供了一种羊栖菜中抑藻活性化合物的制备方法，所述制备方法按如下的步骤进行：

S1:新鲜羊栖菜经清洗后，阴处自然风干，人工或机械粉碎过40目筛；称取羊栖菜粉末，按料液比1:10（M/V）加入85%乙醇，25℃浸提24h，用布氏漏斗进行抽滤得到滤液；重复提取3次后合并滤液，滤液经减压蒸发至无醇味；检测该浓缩液对赤潮异弯藻生长强抑制效果；

S2:浓缩液依次使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，每次萃取重复3次，萃取液经旋转蒸发得到组分A、组分B、组分C与组分D；组分A经抑藻活性检测具有抑制赤潮异弯藻的活性；

S3：组分A采用硅胶柱层析进行分离，得到11个再分组分，分别进行抑藻活性检测；经抑藻活性检测，其中4个再分组分A3、A4、A5和A6具有显著抑制赤潮异弯藻生长的活性；除A3组分继续进行硅胶柱和SephadexLH-20凝胶柱层析分离外，其余组分采用硅胶薄层层析进行制备；A3组分经凝胶柱层析分离后得到6个组分；其中A3-2、A3-3与A3-4具有抑制赤潮异弯藻生长的活性，且有较高的纯度；A3-2、A3-3和A4-4经NMR与TOF-MS鉴定，分别为岩藻甾醇、24-氢过氧基-24-乙烯基胆甾醇和马尾藻甾醇，均为甾醇类化合物。

根据上述技术方案，所述步骤S3中，组分A采用200-300目硅胶柱层析进行分离，洗脱液均为体积比为石油醚：丙酮（30:1，25:1，20:1，10:1，5:1，1:1，0:1），梯度洗脱，流速为1.0mL/min，洗脱至所有物质流出；所有组分经减压浓缩，点样于硅胶GF-254薄层色谱板上进行层析，以体积比为1:5-1:1氯仿/石油醚为展开剂；硫酸乙醇溶液显色后，合并相同馏分后，得到组份A1-A11。