[发明专利]油红O的应用及定量检测组织或细胞内脂质的方法

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及油红O或其化学结构可接受的盐应用于制备标记脂滴的荧光染料，在细胞或组织水平对脂滴进行荧光标记，实现定量检测脂滴。油红O或其化学结构可接受的盐具有特异性标记、荧光信号稳定等特点，可应用于制备与脂质(脂滴)代谢相关疾病的诊断试剂，科研和医疗具有方面有的广阔应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药和诊断试剂技术领域，具体而言，本发明涉及对油红O染料荧光属性的发现与荧光属性参数的确定，并在细胞水平和组织水平对于细胞内脂滴定量检测的应用。

背景技术

油红O(oil-red O，ORO)又名苏丹红5B，是一种分子式为C₂₆H₂₄N₄O，分子量为408.495的化学试剂(分子结构式如式1)。

油红O染料通常被用于脂质染色，其染色原理一般被认为是物理上的溶解作用或吸附作用，通过自身的亲脂和显色特性指示生物样本内的脂质成分，即先把油红O染料溶于有机溶剂中，细胞样本或冰冻切片内的脂质对于油红O染料的溶解度较在原溶剂中的溶解度更大，所以染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。因此，在科学研究和临床诊断中，油红O染色常用于显示细胞、组织和器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着，在代谢、心血管、内分泌和肿瘤等疾病领域被广泛应用。

脂滴(lipid droplets,LDs)是细胞内中性脂的主要贮存场所，广泛存在于细菌、酵母、植物、昆虫以及动物细胞中。脂滴是一种呈球状的细胞器，它的核心由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，主要功能是动态调节细胞的能量平衡。在脂肪组织中，脂滴主要用于脂质(甘油三酯)的储存，而在其它组织中细胞内出现大量脂滴的现象被称为脂肪变性。当肝细胞内大量脂滴蓄积(脂肪水平大于5％)则是判断脂肪肝的诊断标准。随着对于脂滴研究的日益深入，发现细胞内脂滴的数量、大小和分布受到多基因调控，并与细胞内应激、自噬等多种调控机制紧密联系。因此，脂滴作为胞内微环境的重要表型，对其的标记在生物医药研究中具有重大的意义。

油红O染料能够对细胞内脂滴进行标记，但传统的油红O染色在临床中仅能对脂肪变性进行定性鉴别，或基于主观判断的严重程度诊断，在科研中则限于定性和定位的实验结果。目前还没有利用油红O染色来定量测定脂肪的报道。

荧光信号的标记和示踪作用目前被广泛应用于生命科学研究中，其中荧光染料、荧光标记抗体和荧光蛋白作为信号载体常被应用于对各种生物分子的定量检测。在形态学研究领域，荧光标记在传统研究方法中(如免疫荧光)主要用于对特定生命靶标的定性和定位研究。然而，结合现代高通量成像设备和图像分析软件，荧光信号高特异性和低背景信号的特点在图像定量分析中具有独特的优势。如运用现代高内涵成像技术，不仅能获得高通量生物学图像信息，还能通过相关分析软件对荧光信号进行荧光面积、荧光强度、位置关系等各类参数的分析，并且获得以细胞为单位的检测结果。

我们在前期研究中发现油红O染料能够被激发出特异性荧光信号，其荧光染料属性有望拓展对脂滴研究的应用范围，并实现对脂滴的多参数定量分析。

通过油红O对脂滴的标记，在高通量图像采集和分析系统中获取其荧光信号，即能实现对细胞内脂滴数量、大小(分级)、强度、分布信息的收集和定量分析，为脂滴相关的生命科学研究提供了有力的研究工具。

发明内容

本发明旨在提供油红O或其化学结构上可接受的盐的应用。

本发明另一个目的在于提供定量检测脂质(脂滴)的方法，尤其是定量检测细胞内脂滴的方法。

技术方案为，将油红O或其化学结构上可接受的盐应用于制备标记脂质(脂滴)的荧光染料。具体的，在细胞或组织水平对脂质(脂滴)进行荧光标记，将油红O或其化学结构上可接受的盐应用制备在细胞水平或组织水平定量检测脂质(脂滴)的荧光染料。